| 摘 要： | 目的：利用成簇规律性间隔短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeat, CRISPR）相关蛋白9(CRISP associated protein 9,Cas9)技术构建微小核糖核酸-551b(mi R-551b)基因敲除小鼠模型。方法：选择健康C57BL/6J小鼠,针对mi R-551b外显子1区域,设计导向RNA(guide RNA,g RNA),构建Cas9载体质粒,将体外转录的Cas9 RNA及g RNA显微注射入小鼠的受精卵并体外培养。将培养合格的胚胎移植到代孕小鼠的输卵管中,待小鼠生育后得到F0代小鼠,使用基因测序确定基因敲除情况,与野生型小鼠繁育后,得到F1代杂合小鼠,F1代小鼠经自交繁育获得F2代小鼠,F3代小鼠由F2代纯合小鼠自交获得,采用电泳鉴定小鼠基因型,RT-PCR检测F3代小鼠组织mi R-551b的表达。结果：利用CRISPR/Cas9技术构建模型小鼠得到F0代小鼠,通过测序筛选出缺失目标序列的F0代杂合子小鼠。与WT小鼠繁育后,琼脂糖凝胶电泳及测序筛选出F1代杂合小鼠,同样...
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