| 人抗HBsAg单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白基因的构建、表达及活性鉴定 |
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| 引用本文： | 孟艳玲,温伟红,薛茜,张勇,张巍,鲍炜,任君琳,贾林涛,王成济,杨安钢. 人抗HBsAg单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白基因的构建、表达及活性鉴定[J]. 医学争鸣, 2006, 27(15): 1349-1352 |
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| 作者姓名： | 孟艳玲 温伟红 薛茜 张勇 张巍 鲍炜 任君琳 贾林涛 王成济 杨安钢 |
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| 作者单位： | 第四军医大学基础部免疫学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033 |
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| 基金项目： | 国家研究发展基金，中国科学院资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建人抗HBsAg单链抗体(ScFv)/鱼精蛋白截短体(truncated protamine, tP)融合基因,在大肠杆菌中进行表达纯化并分析ScFv/tP融合蛋白的活性. 方法:设计引物扩增人抗HBsAg ScFv HBs15基因,在其3'端引物引入tP的编码基因,PCR扩增获得ScFv/tP融合基因,将其克隆入原核表达载体pET-32a后,在大肠杆菌BL2l(DE3)LysS内诱导表达. 表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,用Ni-NTA螯合层析介质纯化. 间接ELISA分析ScFv/tP融合蛋白的亲和活性,凝胶迁移阻滞实验检测ScFv/tP融合蛋白与DNA结合的情况. 结果:成功获得人抗HBsAg ScFv/tP融合基因,经IPTG诱导后在大肠杆菌中表达,表达的ScFv/tP融合蛋白不仅保持了与HBsAg结合的能力,同时具有DNA结合活性. 结论:ScFv与tP融合后,同时具有与抗原和DNA结合的活性,为该ScFv的进一步应用奠定了基础.
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| 关 键 词： | 单链抗体 肝炎表面抗原 乙型 鱼精蛋白类 |
| 文章编号： | 1000-2790(2006)15-1349-04 |
| 收稿时间： | 2005-11-24 |
| 修稿时间： | 2005-12-14 |
Construction and expression of human anti-HBsAg ScFv/tP fusion protein in E. coli and identification of its binding activity |
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| MENG Yan-Ling,WEN Wei-Hong,XUE Qian,ZHANG Yong,ZHANG Wei,BAO Wei,REN Jun-Lin,JIA Lin-Tao,WANG Cheng-Ji,YANG An-Gang. Construction and expression of human anti-HBsAg ScFv/tP fusion protein in E. coli and identification of its binding activity[J]. Negative, 2006, 27(15): 1349-1352 |
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| Authors: | MENG Yan-Ling WEN Wei-Hong XUE Qian ZHANG Yong ZHANG Wei BAO Wei REN Jun-Lin JIA Lin-Tao WANG Cheng-Ji YANG An-Gang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | single chain antibody HBsAg protamine |
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