| 新型CHO/dhfr-细胞定点整合和表达系统的建立 |
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| 引用本文： | 刘志刚,林建波,许凌峰,徐桂清,俞炜源. 新型CHO/dhfr-细胞定点整合和表达系统的建立[J]. 军事医学科学院院刊, 2004, 28(6): 501-504 |
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| 作者姓名： | 刘志刚 林建波 许凌峰 徐桂清 俞炜源 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划("863"计划)资助项目(2001AA215351) |
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| 摘 要： | 目的建立CHO/dhfr-细胞的定点整合和表达系统.方法利用常规分子生物学方法,构建了一个新的高效筛选表达载体,该载体含有一个由FRT(flp recombination target)位点、报告基因(LacZ)及筛选基因(zeocin)三片段构成的融合基因,而且该基因的表达受一个弱化的SV40启动子的控制.借助于随机整合及高效筛选,实现FRT位点在CHO/dhfr-细胞基因组中转录活跃区的整合,然后利用该位点介导的特异性重组实现了目的基因(单链抗体-尿激酶融合基因)的定点整合和有效表达,而且随后通过DHFR/MTX系统的加压扩增,以提高单链抗体-尿激酶融合基因在宿主细胞中的表达水平.结果与结论获得了能够实现外源基因在基因组中定点整合和有效表达的CHO/dhfr-细胞系,并利用该细胞系实现了单链抗体-尿激酶融合基因的高表达,表达量达到5 μg/(106细胞·24 h).
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| 关 键 词： | CHO／dhfr^-细胞 flp—FRT重组系统 定点整合 基因表达 |
| 文章编号： | 1000-5501(2004)06-0501-04 |
Construction of targeted integration and high expression system in CHO/dhfr- cell line |
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| LIU Zhi-Gang,LIN Jian-Bo,XU Ling-Feng,XU Gui-Qing,YU Wei-Yuan. Construction of targeted integration and high expression system in CHO/dhfr- cell line[J]. Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences, 2004, 28(6): 501-504 |
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| Authors: | LIU Zhi-Gang LIN Jian-Bo XU Ling-Feng XU Gui-Qing YU Wei-Yuan |
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| Affiliation: | LIU Zhi-Gang,LIN Jian-Bo,XU Ling-Feng,XU Gui-Qing,YU Wei-Yuan* |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | CHO/dhfr- cell line flp-FRT recombination system targeted integration gene expression |
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