间日疟原虫红内期SSUrRNA基因片段的扩增、测序及诊断应用 |
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引用本文: | 高世同,龙彩虹,等.间日疟原虫红内期SSUrRNA基因片段的扩增、测序及诊断应用[J].中华国际医学杂志,2002,2(2):159-161. |
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作者姓名: | 高世同 龙彩虹 |
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作者单位: | [1]深圳市卫生防疫站医学分子生物学重点研究室,中国深圳518020 [2]华南农业大学寄生虫学研究室 |
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摘 要: | 目的:体外扩增间日疟原虫(深圳株)红内期小亚单位核糖体核糖核酸编码基因(SSUrDNA)片段,克隆测序分析,并探讨其诊断应用。方法:设计1对特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)从间日疟患血样中扩增出间日疟原虫SSUrDNA片段;用PUC19质粒T载体构建重组子导入大肠杆菌JM109;阳性克隆双酶切鉴定后,双脱氧末端终止法测定序列;以SSUrDNA为靶基因,PCR诊断间日疟,双盲法检测40份血样(28份镜检阳性的血样,12份健康血)。结果:间日疟原虫SSUrDNA扩增片段大小约为341bp;阳性克隆双酶切及PCR扩增均得到预期大小的片段;序列测定插入片段为341bp,与SalI株顺序相比,仅在第151位处缺失1个碱基C;以SSUrDNA为靶基因,双盲法检测镜检阳性及健康人血样,结果完全正确。结论:所克隆的间日疟原虫SSUrDNA片段序列在间日疟原虫虫株间高度保守,以其为靶基因建立的PCR检测方法适用于间日疟的诊断。
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关 键 词: | 章日疟原虫 红内期 SSUrRNA 基因片段 扩增 测序 诊断 基因克隆 疟疾 |
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