| 人细胞周期蛋白D1及细胞周期蛋白激酶CDK4的原核表达及鉴定 |
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| 作者姓名： | 王鸿鹤 朱孝峰 谢冰芬 冯公侃 沈竞康 刘宗潮 |
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| 作者单位： | [1]中山大学肿瘤防治中心实验研究部，广东广州510060 [2]中国科学院上海药物研究所，上海200031 |
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| 摘 要： | 【目的】构建表达人细胞周期蛋白Dl及细胞周期蛋白激酶CDK4融合蛋白的重组体。【方法】用RT-PCR从HL-60细胞中扩增细胞周期蛋白D1及CDK4基因片段，克隆到pGEM-T easy载体上。测序鉴定后切下相应的片段，连接到表达载体pET-22b( )上，重组质粒转化大肠杆菌BL21(DL3)，使之高效表达融合蛋白细胞周期蛋白D1及CDK4。SDS-PAGE电泳及Western blotting鉴定表达蛋白。【结果】 用PCR扩增得到了正确的目的基因片段并构建成pET-cyclinD1和pET-CDK4两个原核表达载体。将其转化大肠杆菌，Western blot检测证实了转化的大肠杆菌能表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白。【结论】 本研究成功构建了细胞周期蛋白D1及CDK4原核表达载体，后两在细胞内能正确表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白．
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| 关 键 词： | 人细胞周期蛋白D1 细胞周期蛋白激酶CDK4 HL-60细胞 肿瘤 |
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