| 短发夹状RNA使骨肉瘤细胞缺氧诱导因子HIF-1α基因沉默 |
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| 引用本文： | 杨述华,吴强,叶树楠,田洪涛. 短发夹状RNA使骨肉瘤细胞缺氧诱导因子HIF-1α基因沉默[J]. 中国骨肿瘤骨病, 2004, 3(2): 100-104,114 |
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| 作者姓名： | 杨述华 吴强 叶树楠 田洪涛 |
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| 作者单位： | 430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科 |
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| 摘 要： | 目的构建低氧诱导因子HIF-1α发夹状小干涉RNA真核表达载体，观察发夹状双链小干涉RNA对骨肉瘤细胞HIF-1的转录后的基因沉默效果?方法体外合成两对互补的寡核苷酸链，分别针对缺氧诱导因子HIF-1αmRNA序列的两个靶位点。退火形成双链，插入pSilencer^TM neoU62．1真核表达载体。将构建好的载体经脂质体介导转染骨肉瘤SaOS-2细胞，观察HIF-lα基因的沉默效果。半定量RT—PCR检测HIF-1αmRNA的抑制程度，免疫荧光和免疫印迹(Western Blot)检测HIF-1α蛋白表达情况。结果测序证实成功构建HIF-1α发夹状小干涉RNA真核表达载体。转录生成的发夹状小干涉能够特异抑制HIF-1α表达。RT—PCR结果显示针对HIF-1αmRNA序列的两个靶位点的沉默效果分别为69％和92％，免疫荧光显示转染后荧光强度显著降低，免疫印迹显示两个靶位点的发夹状小干涉RNA分别使HIF-1α蛋白表达下降66％和90％。结论通过体内转录生成的发夹状小干涉RNA能够使骨肉瘤细胞缺氧诱导因子HIF-1α基因沉默。
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| 关 键 词： | 短发夹状RNA 骨肉瘤 细胞缺氧诱导因子 HIF-1α基因 基因沉默 RNAi 基因功能 |
| 修稿时间： | 2004-02-12 |
The small hairpin RNAs silencing the hypoxia inducible factor - 1αgene in osteosarcoma cell |
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| YANG Shu-hua,WU Qiang,YE Shunan,et al.. The small hairpin RNAs silencing the hypoxia inducible factor - 1αgene in osteosarcoma cell[J]. Chinse Journal Of Bone Tumor And Bone Disease, 2004, 3(2): 100-104,114 |
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| Authors: | YANG Shu-hua WU Qiang YE Shunan et al. |
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| Affiliation: | YANG Shu-hua,WU Qiang,YE Shunan,et al. Department of Orthopaedic Union Hospital,Tongji Medical College Huazhong University of Science and Technology,WuHan 430022,China |
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