含人TNF-α基因的重组逆转录病毒载体的构建、包装及对人肝癌细胞的感染

利用逆转录病毒载体LN系列的三种载体LXSN,LNCX和LNSX构建了插入TNF_α基因的重组逆转录病毒载体L-tnfSN,LNC-tnf和LNS-tnf。重组载体用磷酸钙沉淀法引入病毒包装细胞PA317,经G418筛选后,用NIH3T3细胞测定病毒滴度,结果表明L-tnfSN产生的病毒滴度最高(1×10~5CFU/ml),LNS-tnf次之(5×10~4CFU/ml),LNC-tnf最低(3×10~4CFU/ml)。应用上述三种重组病毒培养液上清,分别感染人肝癌细胞SMMC7721,经G418筛选获得数株抗性克隆。对每种病毒感染的细胞随机挑取6个克隆扩大培养,测定培养液上清中TNFα的分泌量,结果显示L-tnfSN介导感染的克隆中TNFα分泌量最高(382U/10~6细胞/24h),LNC-tnf次之(221u/10~6细胞/24h),LNS-tnF最低(124u/10~6细胞/24h)。反映不同启动子元件有不同的表达强度。