用辣根过氧化物酶蓝色反应法研究神经纤维联系的体会

用辣根过氧化物酪(Horseradish Peroxidase简称HRP)追踪神经纤维联系是现代神经学研究的新方法。它是将HRP溶液注射到神经元末梢部,经一定时间待HRP被末梢摄入,并沿轴突逆向运输到胞体后,进行成色反应显示胞体内HRP颗粒,用明视野或暗视野光学显微镜检查,也可用电子显微镜研究。由于其方法简单、可靠、膺像少和实验周期短,在七十年代中期国外已得到广泛应用,国内也逐步应用于针麻原理的研究。近年来,其实验程序也不断地得以改良。显示胞体内HRP颗粒有二种成色反应:用3-3′二氨基联苯胺(DAB)-H_2O_2与HRP起棕色反应和以联苯胺-H_2O_2与HRP起蓝色反应。Mesulam(1976)用二盐酸联苯胺(BDHC)-H_2O_2与HRP起蓝色反应。证明比棕色反应敏感。我们在进行HRP法研究神经纤维联系的实验中,开始时采用3-3′—二氨基联苯胺-H_2O_2棕色反应法,但由于棕色反应法的脑切片需在暗视野显微镜下才易于观察,而蓝包反应法切片的酶反应细胞则在光视野显微镜下即清晰易见。因此,我们在进行棕色反应法的同时摸索了蓝色反应法,并对这二种反应方法进行了比较。