TGF-β1 mRNA荧光实时定量PCR检测初筛方法的建立及初步运用

目的：建立荧光实时定量检测人转化生长因子异构体（TGF—β1）mRNA的方法。方法：抽取外周静脉血，予EDTA抗凝，用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，用Trizol裂解液提取总RNA，将总RNA逆转录为cDNA，在扩增体系中加入SYBR Green I，应用FQ-RT-PCR定量检测TGF-β1 mRNA。结果：该法检测TGF-β1 mRNA的灵敏度达10^5拷贝／ml，线性范围为10^5～10^11拷贝／ml，Ct值的批内、批间变异系数分别为2．27％～2．56％和4．78％～5．22％。临床应用显示，糖尿病患者PBMC中TGF—β1 mRNA的含量显著高于正常对照组（P〈0．05）。结论：FQ-RT-PCR应用于检测TGF-β1 mRNA的初筛方法具有简便、快速等特点，为临床应用提供了方法学依据。