| 人Tim-3启动子的克隆及其真核报告质粒的构建 |
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| 引用本文： | 张洪昆,鞠瑛,栾芳,郭春,马春红.人Tim-3启动子的克隆及其真核报告质粒的构建[J].山东大学学报(医学版),2008,46(2):115-118. |
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| 作者姓名： | 张洪昆 鞠瑛 栾芳 郭春 马春红 |
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| 作者单位： | 山东大学医学院免疫学研究所,济南,250012 |
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| 摘 要： | 目的克隆人Tim-3基因5′端非编码区处具有启动子活性的片段，构建其真核报告质粒，为进一步研究Tim-3表达调控奠定基础。方法以人基因组DNA为模板，针对人Tim-3启动子5′端非编码区处包括翻译起始点ATG和转录起始点TSS在内的-898～+242片段，设计特异性引物，PCR扩增该片段，命名为Tim-3P2，经双酶切后克隆入pGL3-Basic载体SacⅠ、XhoⅠ位点，构建pGL3-Tim-3P2荧光素酶报告质粒，与内参照pRL-TK用脂质体法瞬时共转染COS-7、RAW264.7和B16细胞系，通过双荧光素酶活性检测确定其启动子活性。结果pGL3-Tim-3P2经PCR、双酶切及DNA测序分析鉴定正确无误；pGL3-Tim-3P2转染RAW264.7和B16细胞（两种细胞均可表达内源性Tim-3）24h和48h，双荧光素酶活性检测显示其启动子相对活性约为pGL3-Basic空载体的2倍；而pGL3-Tim-3P2转染不表达内源性Tim-3的COS-7细胞后检测不到荧光素酶活性。结论成功克隆并构建含有人Tim-3启动子的真核报告质粒，该载体具有特异性Tim-3启动子活性，为进一步研究Tim-3表达调控奠定了基础。
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| 关 键 词： | 基因 Tim-3 人 启动子 Luciferase报告基因 |
| 文章编号： | 1671-7554（2008）02-0115-04 |
| 收稿时间： | 2008-01-02 |
| 修稿时间： | 2008年1月2日 |
Construction of the luciferase reporter plasmid containing human Tim-3 promoter |
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| ZHANG Hong-kun,JU Ying,LUAN Fang,GUO Chun,MA Chun-hong.Construction of the luciferase reporter plasmid containing human Tim-3 promoter[J].Journal of Shandong University:Health Sciences,2008,46(2):115-118. |
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| Authors: | ZHANG Hong-kun JU Ying LUAN Fang GUO Chun MA Chun-hong |
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| Institution: | Insuitute of Immunology, School of Medicine, Shandong University, Jinan 250012, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Genes Tim-3 Human Promoter Luciferase reporter gene |
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