| 抗人肝癌基因工程嵌合Fab抗体的原核表达及复性 |
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| 引用本文： | 邢金良,杨向民,姚西英,宋斐,陈志南.抗人肝癌基因工程嵌合Fab抗体的原核表达及复性[J].中华微生物学和免疫学杂志,2004,24(3):189-193. |
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| 作者姓名： | 邢金良 杨向民 姚西英 宋斐 陈志南 |
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| 作者单位： | 710032,西安,第四军医大学基础部细胞工程研究中心 |
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| 基金项目： | 国家 8 63计划资助项目 (No .2 0 0 1AA2 15 10 1)，国家自然科学基金资助项目 (No .3 0 2 0 0 3 3 0 ) |
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| 摘 要： | 目的 分别在大肠杆菌中高效表达嵌合Fd及嵌合轻链 ,并进行嵌合Fab复性的研究。方法 分别将嵌合Fd及嵌合轻链基因插入到原核表达载体pET32a中 ,构建成重组载体pET32a/cFd和pET32a/cL。转化大肠杆菌后诱导其表达。大量制备表达的嵌合Fd及嵌合轻链后 ,按二者绝对量等摩尔比混合后进行透析复性。然后 ,分别利用SDS PAGE、Westernblot和ELISA进行分析和鉴定。结果 成功获得了嵌合Fd及嵌合轻链的原核非融合高效表达 ,表达蛋白相对分子质量 (Mr)均在 2 4×10 3 左右。表达量分别约占菌体总蛋白的 2 8.3%和 32 .3% ,2种目的蛋白均主要以不溶性的包涵体形式存在。另外 ,嵌合Fd与嵌合轻链在缓慢透析的条件下成功地复性为嵌合Fab抗体 ,Mr 约为 4 2×10 3 ,具有特异性抗原结合活性和良好的亲和力。在起始总蛋白浓度为 10 0 μg/ml时 ,复性效率约为4 9 %。结论 成功实现了嵌合Fab抗体的高效表达及高效复性 ,为进一步探讨其在肝癌治疗中的应用奠定了基础
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| 关 键 词： | 肝癌 嵌合Fab 原核表达 复性 |
| 修稿时间： | 2003年6月29日 |
Prokaryotic expression and renaturation of engineering chimeric Fab antibody against human hepatoma |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hepatoma Chimeric Fab Prokaryotic expression Renaturation |
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