| Tet-on基因表达系统转染骨髓基质干细胞和诱导调控效应检测 |
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| 引用本文： | 盛璞义,廖威明,李晓艳,李佛保,何智勇,黄纲,谭美珍.Tet-on基因表达系统转染骨髓基质干细胞和诱导调控效应检测[J].中华骨科杂志,2003,23(3):170-172. |
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| 作者姓名： | 盛璞义 廖威明 李晓艳 李佛保 何智勇 黄纲 谭美珍 |
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| 作者单位： | 510080,广州,中山大学附属第一医院骨科 |
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| 基金项目： | 广东省科委自然科学基金青年项目(001381)，科委社会重大攻关项目(730307)，卫生厅科研基金项目(A2001115) |
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| 摘 要： | 目的 探讨利用Tet-on基因表达系统调控目的基因在骨髓基质干细胞中表达的可能性和量效关系，为利用该系统调控BMP基因在骨髓基质干细胞中的表达奠定基础。方法 以荧光素酶（luciferase)基因为目的基因，应用Lipofectamine介导的瞬间转染方法。将pTet-on调节质粒和pTRE-luciferase反应质粒共转染骨髓基质干细胞，加入系列浓度的强力霉素（doxycyline)后，观察doxy-cyline的诱导效应。结果 （1）pTet-on表达系统质粒DNA经HindⅢ单酶切，琼脂糖凝胶电泳后，可见6.02kb和1.38kb两个片段；pTRE-luciferase质粒经HindⅢ单酶切线性化，可见5.2kb的片段，均符合质粒图谱。（2）随着doxycyline浓度的增加，荧光素酶的活性也逐渐增加，未转染的骨髓基质干细胞虽经doxycyline诱导，但其RLU值与空白对照（蒸馏水）非常接近，说明未转染的骨髓基质干细胞不受doxy-cyline诱导，而转染的骨髓基质干细胞在未加入诱导剂量，其RLU（relative-luciferase-unit)值也接近空白对照值。结论 转染Tet-on基因表达控制系统的骨髓基质干细胞对doxycyline诱导具有较好的反应性，目的基因荧光素酶基因的表达效力对doxycyline具在严格的计量依赖关系。因此，利用Tet-on基因调控系统对目标基因在骨髓基质干细胞中的表达进行调控是可行的。
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| 关 键 词： | Tet－on 基因表达 骨髓基质干细胞 基因转染 基因调控 |
| 修稿时间： | 2001年10月31 |
The transfection of bone marrow stem cell with Tet-on regulating system and the pilot study of doxycycline depending expression with Tet-on regulating system |
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| SHENG Pu-yi,LIAO Wei-ming,LI Xiao-yan,et al..The transfection of bone marrow stem cell with Tet-on regulating system and the pilot study of doxycycline depending expression with Tet-on regulating system[J].Chinese Journal of Orthopaedics,2003,23(3):170-172. |
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| Authors: | SHENG Pu-yi LIAO Wei-ming LI Xiao-yan |
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| Institution: | SHENG Pu-yi,LIAO Wei-ming,LI Xiao-yan,et al. Department of Orthopaedics,the First Affiliated Hospital,Sun Yat-Sen University,Guangzhou 510080,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Gene expression Bone marrow Stem cells |
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