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微小 RNA-335-3p靶向小鼠双微体基因调控骨髓瘤细胞的增殖和凋亡
引用本文:于云祥,龚泰芳,刘小涛,柯文,李彬彬. 微小 RNA-335-3p靶向小鼠双微体基因调控骨髓瘤细胞的增殖和凋亡[J]. 安徽医药, 2021, 25(12): 2491-2495. DOI: 10.3969/j.issn.1009-6469.2021.12.037
作者姓名:于云祥  龚泰芳  刘小涛  柯文  李彬彬
作者单位:十堰市太和医院骨一科,湖北 十堰442000
摘    要:目的 探讨微小RNA(miR)-335-3p对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 2018年5月至2019年1月,培养正常骨髓细胞MNC和骨髓瘤细胞KM3和U266,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-335-3p表达水平.将KM3细胞分为miR-NC组(转染模拟对照序列)、miR-335-3p组[转染miR-335-3p模拟物(miR-335-3p mimics)]、pcDNA3.1+miR-335-3p组(共转染空载体和miR-335-3p mimics)和pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组[共转染小鼠双微体基因(MDM2)过表达载体和miR-335-3p mimics],MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡的影响,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白和Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证KM3细胞中miR-335-3p与MDM2调控关系.结果 骨髓瘤细胞KM3和U266中miR-335-3p表达水平分别为0.24±0.01、0.38±0.02,显著低于正常骨髓细胞MNC中的miR-335-3p表达水平0.77±0.03(均P<0.05).与miR-NC组比较,miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.60±0.03)比(0.99±0.06);72 h:(0.82±0.05)比(1.67±0.07)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均降低(均P<0.05),细胞凋亡率[(24.31±0.99)%比(8.13±0.83)%]、细胞中P21和Bax蛋白表达均升高(均P<0.05).miR-335-3p在KM3细胞中负调控MDM2表达.与pcDNA3.1+miR-335-3p组比较,pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.80±0.05)比(0.63±0.04);72 h:(1.28±0.06)比(0.88±0.05)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均升高(均P<0.05),凋亡率[(15.34±0.66)%比(23.98±1.41)%]、细胞中P21、Bax蛋白表达均降低(均P<0.05).结论 miR-335-3p可能通过下调MDM2表达抑制骨髓瘤细胞的增殖,并诱导细胞凋亡.

关 键 词:多发性骨髓瘤  微小RNA-335-3p  小鼠双微体基因  细胞增殖  细胞凋亡

MiR-335-3p regulates proliferation and apoptosis of myeloma cells by targeting MDM2 gene
YU Yunxiang,GONG Taifang,LIU Xiaotao,KE Wen,LI Binbin. MiR-335-3p regulates proliferation and apoptosis of myeloma cells by targeting MDM2 gene[J]. Anhui Medical and Pharmaceutical Journal, 2021, 25(12): 2491-2495. DOI: 10.3969/j.issn.1009-6469.2021.12.037
Authors:YU Yunxiang  GONG Taifang  LIU Xiaotao  KE Wen  LI Binbin
Affiliation:Department of Orthopedics, Taihe Hospital, Shiyan, Shiyan, Hubei 442000, China
Abstract:
Keywords:Multiple myeloma   MicroRNA-335-3p   Mouse double minute 2   Cell proliferation   Apoptosis
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