大血藤总酚酸调控微小 RNA-155对缺氧复氧心肌细胞的细胞活性凋亡及氧化应激的影响

目的 探讨大血藤总酚酸对缺氧复氧心肌细胞的细胞活性凋亡及氧化应激的影响及分子机制.方法 2019年12月至2020年8月,心肌细胞H9C2分为对照组(正常培养)、缺氧复氧组(缺氧4 h,复氧12 h)、大血藤总酚酸低、中、高浓度组(造模前分别用12.5、25.0、50.0 mg/L大血藤总酚酸培养2 h,然后进行缺氧复氧处理)、大血藤总酚酸-H+NC组(将miR-155模拟物阴性对照转染至H9C2中再用50.0 mg/L大血藤总酚酸培养,最后进行缺氧复氧处理)、大血藤总酚酸-H+miR-155 mimic组(将miR-155模拟物转染至H9C2中再用50.0 mg/L大血藤总酚酸培养,最后进行缺氧复氧处理).实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测微小RNA-155(miR-155)表达水平;MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blotting)检测蛋白表达;试剂盒检测细胞培养液中肌酸激酶、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛含量.结果 缺氧复氧处理的心肌细胞中miR-155表达水平升高,细胞吸光度降低,心肌细胞凋亡率升高,活化胱天蛋白酶-3(cleaved-caspase-3)表达水平升高,胱天蛋白酶-3前体(pro-caspase-3)表达水平降低,心肌细胞中肌酸激酶、LDH、丙二醛含量升高(P<0.05).大血藤总酚酸中、高浓度处理后缺氧复氧诱导的心肌细胞中miR-155表达水平降低,细胞吸光度升高,心肌细胞凋亡率降低,cleaved-caspase-3表达水平降低,pro-caspase-3表达水平升高,心肌细胞中肌酸激酶、LDH、丙二醛含量降低,且呈浓度依赖性(P<0.05);而大血藤总酚酸低浓度组各数据无显著变化.过表达miR-155可逆转大血藤总酚酸对缺氧复氧诱导的心肌细胞活性、凋亡(22.73±0.58)％比(13.55±0.33)％,P<0.05]和肌酸激酶(79.19±2.78)U/L比(41.22±2.31)U/L,P<0.05]、LDH(44.20±2.80)U/L比(24.77±2.46)U/L,P<0.05]、丙二醛(24.05±1.28)μmol/L比(12.73±0.59)μmol/L,P<0.05]含量的影响.结论 大血藤总酚酸可能通过下调miR-155抑制缺氧复氧心肌细胞的凋亡及氧化应激.

Effect of Sargentodoxa cuneatatotal phenolic acid on cell activity, apoptosis and oxidative stress of hypoxia-reoxygenation cardiomyocytes by regulating miR-155