亚砷酸诱导人鼻咽癌细胞Ras相关结构域家族1A基因去甲基化表达的研究

目的 研究亚砷酸诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞株中抑癌基因Ras相关结构域家族1A基因(RAS association domain family gene 1A,RASSFIA)的表达.方法 体外培养的CNE-2Z细胞分别加入不同浓度的亚砷酸,并作用不同时间.应用台盼蓝染色法筛选出亚砷酸抑制CNE-2Z细胞生长的最佳浓度,检测IC_(50)值;流式细胞术检测细胞周期的改变;用终浓度为2 μmol/L、1 μmol/L、0.5 μmol/L的亚砷酸加入鼻咽癌CNE-2Z细胞系和不加药物的空白对照组,作用48 h后,采用甲基化特异性PCR法检测亚砷酸处理前后RASSF1A基因去甲基化的情况,采用反转录PCR检测鼻咽癌CNE-2Z细胞系中RASSFIA基因亚砷酸处理前后mRNA水平的表达情况,采用Western blot方法 检测亚砷酸处理前后RASSF1A基因蛋白质水平的表达情况.结果 亚砷酸对细胞增殖的抑制作用具有明显的时间和剂量效应.不同浓度的亚砷酸作用细胞24 h、48 h、72 h后,其IC_(50)值分别为(1.50±0.05)、(1.09±0.13)、(0.65±0.04)μmol/L,亚砷酸使细胞周期阻滞于S期和G2/M期;RASSF1A经亚砷酸作用后甲基化随着作用浓度的增高逐渐减弱,而去甲基化随着作用浓度的增高逐渐增强,且亚砷酸作用后RASSF1A在mRNA水平和蛋白质水平表达明显增强.空白对照组和不同浓度亚砷酸作用CNE-2Z细胞的处理组之间差异均有统计学意义(P值均<0.05),不同浓度亚砷酸作用CNE-2Z细胞的处理组之间差异均有统计学意义(P值均<0.05).结论 亚砷酸可诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞株中RASSF1A表达增强,从而阻滞鼻咽癌细胞的增殖分化.

Induced RAS association domain family gene 1A gene expression by arsenic trioxide in nasopharyngeal carcinoma cell