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| Livin基因RNAi表达载体的构建及其沉默效应观察 | |
| 引用本文： | 焦伊胜,张淑兰,王永来,刘晓梅,王桂玲. Livin基因RNAi表达载体的构建及其沉默效应观察[J]. 现代肿瘤医学, 2009, 17(1) |
| 作者姓名： | 焦伊胜 张淑兰 王永来 刘晓梅 王桂玲 |
| 作者单位： | 1. 中国医科大学附属盛京医院妇产科,辽宁,沈阳110004 2. 中国医科大学附属盛京医院中心实验室,辽宁,沈阳110004 3. 中国医科大学细胞生物学教研室,辽宁,沈阳110001 |
| 基金项目： | 辽宁省教育厅高等学校科研项目 |
| 摘 要： | 目的:构建针对人Livin基因的短发夹状小干扰RNA(shRNA)表达载体,并观察该载体对Livin基因表达的沉默效应.方法:设计并合成4个Livin靶向的发夹状siRNA靶序列,退火后分别连接入pGCL-GFP慢病毒表达载体,转化,扩增后测序.以含有Livin基因的质粒为模板,扩增Livin基因cDNA序列的特异性片段,连接,克隆入真核表达载体pdsRED2-N1-3FLAG.将构建好的Livin基因过表达克隆质粒和不同靶点的RNAi表达载体质粒,经lipfectamine2000包裹,共转染人人293T细胞,Western blot和荧光显微镜检测Livin蛋白的表达情况,判断不同靶点的干扰效果.结果:Livin基因RNAi的表达载体pGCL-GFP-shLivin和Livin基因过表达载体pdsRED2-N1-Livin的阳性克隆序列正确.人293T细胞Livin蛋白表达90%被阻断.结论:成功构建高效阻断Livin基因表达的RNAi慢病毒表达载体,为应用RNAi进一步研究Livin基因的生物学功能奠定基础. |
| 关 键 词： | RNA干扰 慢病毒载体 基因治疗 |
Construction of siRNA vector of Livin gene and observation of its silence efficiency |
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| JIAO Yis-heng,ZHANG Shu-lan,WANG Yong-lai,LIU Xiao-mei,WANG Gui-ling. Construction of siRNA vector of Livin gene and observation of its silence efficiency[J]. Journal of Modern Oncology, 2009, 17(1) | |
| Authors: | JIAO Yis-heng ZHANG Shu-lan WANG Yong-lai LIU Xiao-mei WANG Gui-ling |
| Abstract: | |
| Keywords: | Livin |
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