油酸对人正常和瘢痕成纤维细胞增殖和分泌炎症介质的影响

目的 探讨油酸对人正常Fb和瘢痕Fb增殖和分泌炎症介质的影响. 方法 体外培养人正常Fb和瘢痕Fb,分别按照随机数字表法分为7组(各组样本数为8):空白对照组,除常规成分外培养液中不再添加其他物质；乙醇对照组,培养液中加入终浓度为体积分数2％无水乙醇；不同浓度油酸组,即0.25、0.50、1.00、2.00以及4.00 mmol/L油酸组,培养液中分别加入相应终浓度的油酸(以含体积分数2％无水乙醇培养液配制).采用锥虫蓝染色法观察各组细胞培养1～5d的生长情况.于倒置相差显微镜和透射电镜下观察2种细胞2个对照组、1.00 mmol/L油酸组细胞培养2d的细胞结构,采用流式细胞仪检测2种细胞2个对照组及1.00 mmol/L油酸组细胞培养2d的细胞周期.噻唑蓝法检测各组细胞培养2d的增殖情况.取各组细胞培养2d时的培养上清液,采用改良Griess法测定NO含量,ELISA法检测TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-8含量.对数据进行多因素方差分析及重复测量设计的方差分析. 结果 (1)正常Fb和瘢痕Fb的空白对照组与乙醇对照组比较,各指标均无明显差别.(2)培养2～5d,正常Fb和瘢痕Fb 2.00、4.00 mmol/L油酸组细胞数量均低于对应的2个对照组(F值分别为13.773、11.344,P值均小于0.01).(3)培养2d,正常Fb和瘢痕Fb1.00 mmol/L油酸组细胞数量明显减少,部分细胞开始堆积、变圆易脱落；细胞膜不完整,线粒体空泡变性,核固缩,胞内可见脂滴.(4)正常Fb 1.00 mmol/L油酸组的G0/G1期和G2/M期细胞百分比[(93.56±9.98)％、(2.01士0.75)％]显著高于空白对照组[(84.23±10.96)％、(0.37±0.16)％],F值分别为3.026、34.751,P＜0.05或P＜0.01；S期细胞百分比为(4.42 ±0.87)％,明显低于空白对照组的(16.06±1.74)％,F=136.120,P＜0.01.瘢痕Fb 1.00 mmol/L油酸组G0/G1期和G2/M期细胞百分比分别为(93.86±13.90)％、(1.89±0.66)％,显著高于空白对照组[(83.88±10.42)％、(0.41±0.17)％],F值分别为3.529、32.710,P＜0.05或P＜0.01；S期细胞百分比为(3.87±0.63)％,明显低于空白对照组的(15.89±2.02)％,F=116.508,P＜0.01.(5)正常Fb和瘢痕Fb 0.50 ～4.00 mmol/L油酸组细胞增殖率显著低于对应的2个对照组(F值分别为215.945、194.555,P＜0.05或P＜0.01).(6)正常Fb各浓度油酸组细胞分泌NO水平明显高于2个对照组(F=30.240,P＜0.05或P＜0.01)；瘢痕Fb 1.00～ 4.00 mmol/L油酸组细胞分泌NO水平明显高于2个对照组(F=12.495,P＜0.01).正常Fb和瘢痕Fb 2.00、4.00 mmol/L油酸组细胞分泌TNF-α、IL-6水平明显高于对应的2个对照组(F TNF-α值分别为6.911、3.818,FIL-6值分别为16.939、11.600,P ＜0.05或P＜0.01).正常Fb和瘢痕Fb各浓度油酸组细胞分泌IL-1β水平显著高于对应的2个对照组(F值分别为25.117、9.137,P值均小于0.01).正常Fb 1.00～4.00 mmol/L油酸组细胞分泌IL-8水平明显高于2个对照组(F=2.717,P＜0.05或P＜0.01),瘢痕Fb 2.00、4.00 mmol/L油酸组细胞分泌的IL-8水平明显高于2个对照组(F=3.338,P＜0.05).正常Fb和瘢痕Fb相同浓度油酸组各炎症因子水平比较无明显差异(F值为0.120 ～3.766,P值均大于0.05). 结论 高浓度油酸虽能抑制瘢痕Fb增殖,但同时也抑制正常Fb增殖,且高浓度油酸能同时促进正常Fb和瘢痕Fb分泌炎症介质,从而导致过度、持续的炎症反应,不利于创面愈合.

Effect of oleic acid on the proliferation and secretion of pro-inflammatory mediators of human normal fibroblasts and scar fibroblasts