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C3H10T1/2成软骨分化过程中miR-19a与CCND1的表达及调控
引用本文:龚铭,周治宇,代学俊,高蔓蔓,罗嘉全,黄胜,李亮平,邹学农. C3H10T1/2成软骨分化过程中miR-19a与CCND1的表达及调控[J]. 中山大学学报(医学科学版), 2015, 36(1)
作者姓名:龚铭  周治宇  代学俊  高蔓蔓  罗嘉全  黄胜  李亮平  邹学农
作者单位:1. 中山大学附属第一医院脊柱外科∥骨科研究所,广东广州,510080
2. 中山大学附属第一医院脊柱外科∥骨科研究所,广东广州510080;昆明市延安医院脊柱外科,云南昆明650051
基金项目:国家基础研究计划,东莞市高等院校科研机构和医疗卫生单位科技计划项目,国家自然科学基金重点项目
摘    要:[目的]在间充质干细胞诱导成软骨分化过程中,探讨miR-19a与细胞周期基因CCND1之间的关系,为揭示miR-19a参与调控成软骨分化的可能机制提供基础.[方法]选取小鼠间充质干细胞C3H10T1/2为研究对象,运用离心沉淀法进行pellet细胞微球培养,用含有TGF-β3及2%FBS的高糖DMEM进行成软骨诱导并作为实验组,用含2%FBS的高糖DMEM培养(替换)导作为对照组.分别在1、2、3周进行定量PCR检测成软骨分化相关基因表达以及在第3周进行甲苯胺蓝染色.[结果]与对照组比较,细胞功能基因Bax与Klf-4表达均下调,差异具有统计学意义(P<0.05).成软骨分化关键启动因子SOX-9及相关基因aggrecan,collagen Ⅱ,Collagen Xa1的表达均在2周时显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05).通过互联网生物信息学预测CCND1可能是miR-19a的靶基因;在成软骨分化过程中,miR-19a表达逐渐上升(P<0.05),而CCND1的表达与对照组相比逐渐下降(P<0.05).甲苯胺蓝染色pellet细胞微球呈蓝紫色,细胞核呈深蓝色,诱导组中细胞外基质含量明显增多.[结论]在C3H10T1/2成软骨分化过程中,miR-19a参与维持细胞干性及增殖基因表达降低,分化能力得到增强;且miR-19a参与该分化调控过程.

关 键 词:mircoRNA  间充质干细胞  成软骨分化

Mir-19a and CCND1 Gene Expression in Mechanism Exploration of C3H10T1/2 Chondrogenic Differentiation
Abstract:
Keywords:mircoRNAs  mesenchymal stem cells (MSCs)  chondrogenic differentiation
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