弓形体RH株抗原基因SAG1的扩增克隆及鉴定

目的：体外扩增弓形体主要表面抗原SAG1基因，构建pcDNA3-SAG1真核表达质粒，为研制弓形体疫苗奠定基础。方法：采用PCR技术，自行设计一对寡核酸引物（P1，P2），从弓形体RH株基因组DNA中特异扩增出编码SAG1抗原的基因片段，扩增的目的片段经纯化后用EcoR1和HindⅢ双酶切后，克隆到真核表达质粒pcDNA3中，转化入大肠杆菌TG1，用氨苄青霉素和PCR初筛，将PCR扩增阳性的重组子分别用Sac1单酶切、EcoR1和HindⅢ双酶切鉴定，结果成功地构建真核型表达质粒pcDNA3-SAG1，从而为进一步SAG1重组抗原的体外表达创造有利条件。结果：从RH株基因组DNA中特异扩增出编码SAG1的全基因序列，扩增目的基因片段大小与预期长度（1025bp)，相符；将分离、纯化的目的基因片段SAG1任入pcDNA3质粒HindⅢt和EcoR1位点，构建重组质粒pcDNA3-SAG1。结论：成功构建重组质粒pcDNA3-SAG1。