PCSK9抑制剂在ox-LDL诱导HUVECs损伤中的保护作用研究

目的　探讨人类枯草溶菌素转化酶9（PCSK9）抑制剂对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）导致的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护机制。方法　对数生长期HUVECs细胞分为Control组（正常培养），ox-LDL组（50 mg/L ox-LDL诱导24 h），低、中、高剂量PCSK9抑制剂组（分别用5、10、20 μmol/L PCSK9抑制剂预处理24 h，再加入50 mg/L ox-LDL诱导24 h）。采用CCK-8法检测各组细胞活性并计算细胞存活率，实时荧光定量PCR（qPCR）和酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测细胞或细胞培养上清液中肿瘤坏死因子（TNF）-α，白细胞介素（IL）-6和单核细胞趋化蛋白（MCP）-1的转录和分泌水平；流式细胞术检测细胞凋亡情况。Western blot检测细胞凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase-3）和核因子（NF）-κB通路相关蛋白的表达水平。结果　与Control组比较，ox-LDL组细胞存活率下降，TNF-α、IL-6和MCP-1转录及分泌水平升高，细胞凋亡率升高，促凋亡蛋白Bax、Cleaved-Caspase-3表达上调，抗凋亡蛋白Bcl-2下调，磷酸化NF-κB（p-NF-κB）水平上调；同时NF-κB在细胞核内表达上调，胞质中表达下调。中、高剂量PCSK9抑制剂处理后，与ox-LDL组比较，细胞存活率升高，TNF-α、IL-6和MCP-1转录和分泌水平下降，细胞凋亡率下降， Bax、Cleaved-Caspase-3表达下调，Bcl-2表达上调，p-NF-κB水平下降。进一步分析发现，PCSK9抑制剂下调ox-LDL导致的HUVECs细胞核中NF-κB表达，上调胞质中NF-κB的表达（P＜0.05）。结论　PCSK9抑制剂可以抑制ox-LDL导致的HUVECs炎症反应和细胞凋亡，发挥内皮功能保护作用。

The protective effect of PCSK9 inhibitor on HUVECs injury induced by ox-LDL