miR-199a在妊娠糖尿病中的表达及参与胰岛素抵抗的作用机制研究

目的　探究微小RNA（miR）-199a在妊娠糖尿病（GDM）中的表达及调控沉默信息调节因子1（SIRT1）/叉头盒转录因子O1（FOXO1）通路参与胰岛素抵抗（IR）的机制。方法　GDM孕妇56例为GDM组，正常孕妇60例为正常孕妇组，实时荧光定量PCR（qPCR）检测2组胎盘中miR-199a水平；计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）；Pearson相关分析miR-199a与HOMA-IR的相关性。体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo并建立IR模型。miR-199a功能验证：细胞依处理方式不同分为模型组、miRNA inhibitor NC组、miR-199a inhibitor组、miRNA mimic NC组、miR-199a mimic组；qPCR检测各组细胞中miR-199a表达情况，蒽酮法检测细胞内葡萄糖吸收量，试剂盒检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平，Western blot检测SIRT1、FOXO1、乙酰化（Ac）-FOXO1蛋白水平，双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-199a与SIRT1的靶向关系。结果　与正常孕妇组比较，GDM组胎盘中miR-199a、HOMA-IR水平升高（P＜0.05）；GDM组miR-199a水平与HOMA-IR呈正相关（P＜0.05）。棕榈酸、胰岛素共同作用细胞24 h成功建立IR模型。与模型组和miRNA inhibitor NC组比较，miR-199a inhibitor组miR-199a、MDA水平降低，葡萄糖吸收量、SOD水平、SIRT1蛋白水平升高（P＜0.05）。与模型组和miRNA mimic NC组比较，miR-199a mimic组miR-199a和Ac-FOXO1蛋白表达升高、MDA水平升高，葡萄糖吸收量、SIRT1蛋白水平降低（P＜0.05）。Tarbase数据库分析显示，miR-199a与SIRT1存在互补的结合位点，并经双荧光素酶实验证实。结论　GDM患者胎盘中miR-199a高表达，升高的miR-199a可通过靶向下调SIRT1而促进FOXO1乙酰化，导致IR。

The expression of miR-199a in gestational diabetes mellitus and its mechanism in insulin resistance