| HSV-tk基因治疗靶向载体的构建及特异性表达分析 |
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| 引用本文： | Liu XP,Li BJ,Zhang C. HSV-tk基因治疗靶向载体的构建及特异性表达分析[J]. 癌症, 2006, 25(2): 179-184 |
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| 作者姓名： | Liu XP Li BJ Zhang C |
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| 作者单位： | 北京大学深圳医院肝胆胰外科,广东,深圳,518036;深圳北京大学香港科技大学医学中心,广东,深圳,518036 |
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| 基金项目： | 中国科学院资助项目;广东省博士启动基金 |
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| 摘 要： | 背景与目的:阻断肿瘤组织内血管生成和血管化是一个很有发展前景的灭瘤途径之一。胸苷激酶自杀基因系统(herpessimplexvirus-thymidinekinase,HSV-tk/GCV)能有效杀伤血管内皮细胞,目前多采用巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)作为启动子,但其杀伤缺乏特异性。KDR(kinasedomaininsertcontainingreceptor)是血管内皮生长因子的两种受体之一,它在肿瘤血管内皮细胞中高表达,而在正常组织中呈低表达。本研究是构建KDR启动子介导的HSV-tk重组腺病毒、并对其内皮细胞特异性表达作用进行分析。方法:采用pAdeasy系统,按定向克隆方法将KDR-tk片段正向插入表达载体的多克隆位点间,构建受KDR启动子调控并可表达HSV-tk基因的AdKDR-tk,在293细胞中包装、扩增后,体外感染人脐静脉血管内皮细胞系(humanumbilicalvenousendothelialcells,HUVEC)和不表达KDR的肝癌细胞系HepG2。用更昔洛韦(ganciclovir,GCV)处理受染细胞,并以MTT法检测其细胞增殖情况。结果:经限制性酶切分析,RT-PCR及PCR方法鉴定,插入基因大小、位置、方向正确。病毒滴度为1×1010pfu/ml。在感染复数(multiplicityofinfection,MOI)为100的条件下,GCV浓度由0增至50μg/ml时,感染含AdKDR-tk的HUVEC细胞和HepG2细胞存活率由100%分别下降至(28.94±5.67)%和(75.45±2.91)%(P<0.01)。结论:构建的含KDR-tk重组腺病毒可在血管内皮细胞中特异性地表达HSV-tk。
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| 关 键 词： | KDR启动子 单纯疱疹病毒胸苷激酶 靶向基因治疗 腺病毒 血管内皮细胞 HepG2细胞 |
| 文章编号： | 1000-467X（2006）02-0179-06 |
| 收稿时间： | 2005-02-25 |
| 修稿时间： | 2005-10-12 |
Construction and identification of recombinant vectors carrying herpes simplex virus thymidine kinase genes expressed in vascular endothelial cells |
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| Liu Xiao-Ping,Li Bao-Jin,Zhang Chao. Construction and identification of recombinant vectors carrying herpes simplex virus thymidine kinase genes expressed in vascular endothelial cells[J]. Chinese journal of cancer, 2006, 25(2): 179-184 |
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| Authors: | Liu Xiao-Ping Li Bao-Jin Zhang Chao |
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| Affiliation: | Department of Hepatobilliary and Pancreatic Surgery, Shenzhen Hospital, Peking University, Shenzhen, Guangdong 518036, P. R. China. ninliu@163.com |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | KDR promoter Herpes simplex virus thymidine kinase Targeting gene therapy Adenovirus Vascular endothelial cell HepG2 cell |
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