转移潜能不同人肝癌细胞系差异蛋白S100A4的再验证及功能分析

目的解析比较蛋白质组学筛出的差异蛋白S100A4的生物学功能,验证其是否在肝癌转移复发中发挥作用。方法用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、蛋白免疫印迹(WB)及细胞免疫化学法分别对差异蛋白S100A4在转移潜能不同人肝癌细胞系中的表达情况进行再验证;然后,用构建S100A4反义表达质粒,转染高转移潜能人肝癌细胞系MHCC97H,通过系列与侵袭转移有关的检测,观察S100A4表达降低对MHCC97H细胞生物学行为的影响。结果验证结果均证实,S100A4在有转移潜能人肝癌细胞系MHCC97L、MHCC97H中呈高表达。转染S100A4反义重组表达质粒后的侵袭试验显示,穿过人工基底膜细胞数分别是:5.0±1.4[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4],16.4±1.6[MHCC97H/pcDNA3.1(+)],16.9±1.5(MHCC97H);运动试验穿过上室底膜的细胞数为:11.1±3.3[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4],18.9±2.0[MHCC97H/pcDNA3.1(+)],21.9±3.4(MHCC97H);细胞培养上清液中MMP9的定量结果依次为18.2[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4]、28.0[MHCC97H/pcDNA3.1(+)]、31.9ng/ml(MHCC97H);MMP2定量结果依次为29.8[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4]、26.4[MHCC97H/pcDNA3.1(+)]、26.5ng/ml(MHCC97H)。明胶酶谱分析细胞培养上清液基质金属蛋白酶(MMP)显示,S100A4表达降低的MHCC97H细胞分泌的MMP9活性明显弱于对照组。结论pcDNA3.1(+)ASS100A4转染MHCC97H细胞后,细胞的运动与侵袭潜能均明显降低。细胞MMP9分泌量也显著降低。而细胞分泌MMP2的量则变化不明显。提示差异蛋白S100A4通过增强肝癌细胞的运动侵袭能力和上调MMP的分泌参与肝癌细胞的侵袭转移过程。

Verification and biological function analysis of different protein S100A4 discovered from HCC cell lines