| 人BRAF野生型及V600E突变型真核表达载体的构建及表达 |
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| 引用本文： | 程张军,Xin Shi,汤永辉,Nai-Rong Gao.人BRAF野生型及V600E突变型真核表达载体的构建及表达[J].世界华人消化杂志,2008,16(21):2395-2398. |
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| 作者姓名： | 程张军 Xin Shi 汤永辉 Nai-Rong Gao |
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| 作者单位： | 东南大学附属中大医院普外科,江苏省,南京市,210009 |
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| 摘 要： | 目的:构建BRAF野生型和V600E突变型真核表达载体;转染并筛选稳定表达BRAF的胰腺癌细胞株,为探讨BRAF V600E突变在胰腺癌发生发展中的作用提供合适的细胞模型.方法:将BRAF野生型及V600E突变型cDNA克隆于真核表达载体pCMV-Myc中,构建pCMV-Myc-BRAFW)及pCMV-Myc-BRAFV600E重组质粒,酶切鉴定、测序证实序列正确后,利用脂质体将重组质粒转染胰腺癌细胞Panc-1,经G418培养筛选获得抗性细胞克隆,用RT-PCR和Western blot鉴定野生型和V600E突变型BRAF基因在Panc-1细胞中的表达.结果.酶切鉴定和序列分析证实,重组克隆pCMV-Myc—和pCMV-Myc—BRAFV600E序列正确,RT-PCR和Western blot结果显示G418筛选获得的转基因Panc-1细胞稳定表达BRAF和BRAF V600E.结论:成功构建了pCMV-Myc-BRAFW和pCMV-Myc-BRAFV600E真核表达载体,建立了稳定表达BRAF和BRAF V600E的胰腺癌细胞株.稳定表达BRAF和BRAF V600E的胰腺癌细胞株.稳定表达BRAF和BRAF V600E的胰腺癌细胞株.
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| 关 键 词： | 胰腺癌 逆转录聚合酶链式反应 克隆 真核表达 |
| 收稿时间： | 2008-04-07 |
| 修稿时间： | 2008-05-15 |
Construction and expression of eukaryotic expression vector for human wild-type and V600E mutant BRAF gene |
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| Zhang-Jun Cheng,Xin Shi,Yong-Hui Tang,Nai-Rong Gao.Construction and expression of eukaryotic expression vector for human wild-type and V600E mutant BRAF gene[J].World Chinese Journal of Digestology,2008,16(21):2395-2398. |
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| Authors: | Zhang-Jun Cheng Xin Shi Yong-Hui Tang Nai-Rong Gao |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | BRAF Western blot |
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