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基于腺相关病毒血清型8型介导的Gjb2基因c.109G>A纯合突变耳聋小鼠的基因治疗
作者姓名:成桢哲  金晨曦  冯宝怡  郑晓飞  刘祎晴  吴皓  陶永
作者单位:1. 上海交通大学医学院附属第九人民医院耳鼻咽喉头颈外科;2. 上海市耳鼻疾病转化医学重点实验室;3. 上海交通大学医学院耳科学研究所
基金项目:国家自然科学基金重点项目(81730028)~~;
摘    要:目的·探究腺相关病毒血清型8型(adeno-associated virus serotype 8,AAV8)介导的野生型缝隙连接蛋白β2 (gap junction protein β 2,Gjb2)基因在Gjb2基因c.109G>A纯合突变小鼠(简称Gjb2纯合突变小鼠)耳蜗支持细胞区域的表达情况及安全性,以及对呋塞米引起的听力下降的影响。方法·将带有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的AAV8-GFP病毒,经耳蜗中阶注射入新生Gjb2纯合突变小鼠的内耳,注射14 d后取小鼠耳蜗,荧光显微镜观察基底膜GFP的表达情况。将载有野生型Gjb2基因的AAV8-GJB2-GFP病毒经中阶注射入新生Gjb2纯合突变小鼠内耳后,于4周后通过实时荧光定量PCR和Western blotting检测耳蜗Gjb2 mRNA及其编码的连接子蛋白(connexin 26,CX26)的表达水平,通过免疫荧光法观察其具体表达位置。通过听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)实验评价新生纯合突变小鼠中阶注射AAV8-GJB2-...

关 键 词:腺相关病毒  缝隙连接蛋白β2  支持细胞  呋塞米  基因治疗
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