创伤弧菌核酸检测试剂国家参考品的建立

目的 建立创伤弧菌核酸检测试剂国家参考品并制定质量标准，用于该类试剂的质量评价。方法 收集培养多种创伤弧菌及其他弧菌病原体，经菌落鉴定、16s rRNA测序分析及实时荧光定量PCR试剂检测后筛选出18份样本，稀释、分装后组成创伤弧菌核酸检测试剂国家参考品。邀请不同的实验室对参考品进行协作标定，并对参考品进行均匀性和稳定性考察。结果 建立的国家参考品，包括8份阳性参考品P1～P8、10份阴性参考品N1～N10、1份重复性参考品R和1份检测限参考品L;L使用菌落计数法测定浓度为1×10⁸CFU/mL。4家实验室参与了国家参考品的协作标定，并根据结果制定质量标准为阳性符合率8/8，阴性符合率10/10，检出限要求至少为1×10³CFU/mL及以上阳性，重复性要求检测10次均为阳性，且Ct值或定量值变异系数不大于5.0%。国家参考品均匀性检测的Ct值变异系数均不高于5%，符合要求；在2～8℃冷藏条件、室温放置7天，均未影响参考品稳定性。结论 成功建立了创伤弧菌核酸检测试剂国家参考品，可用于企业试剂研发的质量控制及评价。