| GFP/HBV X融合蛋白重组载体的构建及稳定表达细胞系的建立 |
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| 引用本文： | 杨林,范红梅,陈幼明,谢奇峰,吴盟,陈雪娟,李刚,高志良.GFP/HBV X融合蛋白重组载体的构建及稳定表达细胞系的建立[J].热带医学杂志,2007,7(2):112-115,125. |
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| 作者姓名： | 杨林 范红梅 陈幼明 谢奇峰 吴盟 陈雪娟 李刚 高志良 |
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| 作者单位： | 中山大学附属第三医院感染病科,广东省肝脏疾病研究重点实验室,广州,510630 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;教育部留学回国人员科研启动基金;广东省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的构建绿色荧光蛋白（GFP）与人乙型肝炎病毒（HBV）X基因的重组表达载体，建立稳定表达HBVX蛋白（HBx）与GFP融合蛋白的HepG2细胞系，以进一步研究HBx的生物学功能及其在肝癌发生中的作用。方法应用PCR法从adr亚型HBV质粒pHBVDNA中扩增HBVX基因片段，PCR产物经HindⅢ和KpnⅠ双酶切后定向插入绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1的相应酶切位点，转化宿主菌DH5α，采用上述双酶切及DNA测序鉴定重组质粒pGFP-HBx；采用脂质体转染法将pEGFP-C1质粒、pGFP-HBx重组质粒DNA转染人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞，G418选择抗性细胞克隆，荧光显微镜下观察GFP表达，挑取表达GFP的抗性克隆扩大培养、传代。采用RT-PCR检测转染细胞HBVX基因的表达。结果经酶切及测序鉴定成功构建了GFP-HBVX重组表达载体pGFP-HBx；将pEGFP-C1、pGFP-HBx重组质粒转染HepG2．，经G418筛选15d获得抗性细胞克隆。将带绿色荧光的抗性克隆细胞扩大培养并经传代70次，细胞仍表达强的荧光蛋白。RT-PCR检测表明转染pGFP-HBx重组体的HepG2／GFP-HBx细胞有HBVX转录、表达。结论成功构建了GFP．HBVX真核重组表达载体pGrP-HBx；获得了稳定表达GFP-HBx融合蛋白的HepG2细胞系，这为进一步研究FIBx的生物学功能以及HBx在肝癌发生中的作用与机制打下了基础。
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| 关 键 词： | 乙型肝炎病毒X蛋白 绿色荧光蛋白 重组体 细胞系 |
| 文章编号： | 1672-3619（2007）02-0112-04 |
| 收稿时间： | 2006-10-20 |
| 修稿时间： | 2006-12-25 |
Construction of pGFP/HBV X Gene Recombinant Plasmid and Establishment of Stable Transfected HepG2 Cell Line Expressing Hepatitis B Virus X-GFP Fusion Protein |
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| YANG Lin,FAN Hong-mei,CHEN You-ming,XIE Qi-feng,WU Meng,CHEN Xue-juan,LI Gang,GAO Zhi-liang.Construction of pGFP/HBV X Gene Recombinant Plasmid and Establishment of Stable Transfected HepG2 Cell Line Expressing Hepatitis B Virus X-GFP Fusion Protein[J].Journal Of Tropical Medicine,2007,7(2):112-115,125. |
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| Authors: | YANG Lin FAN Hong-mei CHEN You-ming XIE Qi-feng WU Meng CHEN Xue-juan LI Gang GAO Zhi-liang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | hepatitis B virus X protein green fluorescent protein recombinant cell line |
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