| 大鼠β防御素2基因慢病毒载体的构建及功能检测 |
| |
| 引用本文： | 雷撼,方路,何翔.大鼠β防御素2基因慢病毒载体的构建及功能检测[J].中华实验和临床病毒学杂志,2010,24(3):232-234. |
| |
| 作者姓名： | 雷撼 方路 何翔 |
| |
| 作者单位： | 1. 同济大学医学院附属东方医院呼吸科,上海,200120
2. 上海市杨浦区中心医院 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，上海浦东新区社会发展局基金，上海浦东新区医学领先人才项目基金 |
| |
| 摘 要： | 目的 构建大鼠β防御素2（rBD2）基因慢病毒表达载体,并转染培养细胞检测其表达,为rBD2研究及大鼠体内实验奠定基础.方法 提取大鼠上皮细胞总RNA,PCR扩增获得rBD2基因,双酶切PCR产物和慢病毒载体Lentivirus含H1启动子和绿色荧光蛋白（GFP）],连接构成rBD2基因慢病毒表达载体LV-rBD2,行测序鉴定.用慢病毒包装系统对LV-rBD2进行慢病毒颗粒包装并梯度稀释法测定病毒滴度,病毒液感染培养细胞,RT-PCR和Western Blot检测rBD2表达.结果 凝胶电泳和测序结果表明rBD2基因克隆到慢病毒载体中,序列正确.完成慢病毒颗粒包装,调整病毒滴度至1×105ifu/μl.RT-PCR和Western-Blot显示rBD2基因获得表达.结论 rBD2基因慢病毒表达载体LV-rBD2被成功构建,能转染细胞并获得有效表达.
|
| 关 键 词： | 基因转染技术 表达的序列标记 逆转录聚合酶链反应 印迹法 蛋白质 防御素类 |
| 本文献已被 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
