自噬/Beclin1调节因子1通过Akt-Bad-Bcl-2通路降低乳腺癌化疗敏感性

目的 检测自噬/Beclin1调节因子1(Ambra1)在乳腺癌中的表达及对化疗敏感性的影响，并探讨可能的机制。方法 (1)临床标本测定：回顾性收集2018-03-01-2019-12-30在广西医科大学第二附属医院行手术切除的42例乳腺癌及癌旁组织标本，采用免疫组织化学方法检测Ambra1的表达。(2)细胞实验：通过Ambra1慢病毒表达载体(OE),使Ambra1在乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞高表达，以空载(Empty)作为对照。蛋白质印迹法分别检测细胞内Akt/pAkt、Bad/pBad^s136、Bcl-2和Bax的表达，定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Akt mRNA表达；同时，细胞用紫杉醇(PTX)处理后，细胞计数盒8(CCK8)法和流式细胞术分别检测细胞存活和凋亡。为了研究pAkt的作用，细胞在感染OE的同时，使用GSK690693(GSK)抑制Akt磷酸化，蛋白质印迹法检测Bad/pBad^s136、Bcl-2和Bax表达，流式细胞术和CCK8法分别检测紫杉醇诱导的凋亡和细胞存活。结果 (1)临床标本测定...