| 旋毛虫钙网蛋白的表达和生物学特性鉴定 |
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| 引用本文： | 白圣洁,程永康,王珍,闫树炜,刘若丹,龙绍蓉,崔晶,王中全.旋毛虫钙网蛋白的表达和生物学特性鉴定[J].中国病原生物学杂志,2023(1):63-67+72. |
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| 作者姓名： | 白圣洁 程永康 王珍 闫树炜 刘若丹 龙绍蓉 崔晶 王中全 |
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| 作者单位： | 郑州大学基础医学院病原生物学系 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(No.81971952,82172300)； |
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| 摘 要： | 目的 克隆表达旋毛虫钙网蛋白(TsCRT),并对其生物学特性进行鉴定。方法 通过RT-PCR扩增TsCRT基因，构建重组质粒pMD19T-TsCRT,测序正确后亚克隆至表达载体pQE80L,构建重组表达载体pQE80L-TsCRT,转化大肠埃希菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，通过Western blot、qPCR和免疫荧光试验(IFT)鉴定rTsCRT的反应原性及其在不同虫期的表达与组织定位，通过动物免疫试验观察rTsCRT的免疫原性。结果 成功构建重组表达载体pQE80L-TsCRT,转化DE3后经IPTG诱导表达相对分子质量为47×103的rTsCRT蛋白。用纯化的rTsCRT免疫小鼠3次，血清抗体效价达1∶105。Western blot显示，rTsCRT可被抗rTsCRT血清和旋毛虫感染小鼠血清识别。qPCR检测显示，TsCRT在旋毛虫肌幼虫、肠道感染性幼虫、成虫和新生幼虫期均有转录和表达。IFT试验显示，TsCRT主要定位在旋毛虫的表皮和胚胎中。结论 TsCRT在旋毛虫不同虫期均有表达，重组...
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| 关 键 词： | 旋毛虫 钙网蛋白 克隆表达 重组蛋白 鉴定 |
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