猪囊尾蚴排泄分泌抗原TPx蛋白的筛选验证、T细胞抗原表位预测及真核表达

目的 在对猪囊尾蚴及其排泄分泌抗原(excretory secretory antigen, ESA)非标定量(label-free quantification, LFQ)蛋白质组学分析的基础上，筛选并验证具有调控T细胞免疫应答功能的硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase, TPx)蛋白，预测TPx蛋白的亲水性和T细胞抗原表位并进行真核表达。方法 对猪囊尾蚴ESA差异蛋白进行基因本体论(gene ontology, GO)富集和生物学功能注释，筛选TPx蛋白。运用平行反应监测技术(parallel reaction monitoring, PRM)验证TPx蛋白。运用Kyte&Doolittle法预测TPx蛋白的亲水性，运用Propred软件预测TPx蛋白T细胞抗原表位。采用基于PCR准确合成(PCR-based accurate synthesis, PAS)方法，全基因合成TPx抗原编码基因并克隆至pcDNA3.4载体，构建重组质粒pcDNA3.4-TPx,转染至HEK293细胞，表达和纯化TPx蛋白。结果 根据GO富集和生物学功能注释，筛选出...