SARS-CoV-2结构蛋白S和N的生物信息学比较分析及应用研究

目的 采用生物信息学方法分析新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重要结构蛋白S和N。将S基因和N基因融合并构建重组质粒，重组质粒与骨架质粒在293T细胞中包装后获得重组腺病毒，为利用其融合基因进行疫苗研发提供理论和实验依据。方法 从NCBI数据库中获取S、N蛋白的基因组序列和氨基酸序列，采用生物信息学分析工具SOPMA、IEDB、BLAST、Immunomedicine Group、UniProt预测并分析S和N蛋白的理化性质、二级结构和三级结构、B细胞表位和T细胞表位、抗原决定簇以及相互作用蛋白。分别以S-pcDNA和N-pcDNA质粒为模板，以S-F1、S-F2和N-F3、和N-F4为引物PCR扩增目的基因；通过T4 DNA连接酶连接获得S基因和N基因的融合基因，以连接后的融合基因为模板，以S-F1和N-F4为引物采用重叠PCR扩增融合基因S-N。将融合基因S-N与穿梭表达载体pDC316-mCMV-EGFP连接，获得重组质粒，然后与骨架质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293T细胞，获得重组腺病毒。结果 S蛋白由1 269个氨基酸组成，分子式为C_...