| 结核分枝杆菌MPT64双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用 |
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| 作者姓名： | 谢燕玲 宁唤唤 路延之 康健 白鹭 代婷 胡家豪 徐子晴 刘博 柏银兰 |
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| 作者单位： | 1. 延安大学生命科学学院;2. 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室;3. 空军军医大学军事医学创新中心;4. 空军军医大学基础医学院学员第五大队 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(No.81971560,82272343)；;国家“十三五”重大传染病专项课题(No.2018ZX10302302002004)； |
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| 摘 要： | 目的 建立结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白MPT64的双抗体夹心ELISA检测方法并评价初步应用效果。方法 采用间接ELISA和ELISA叠加试验在各株抗MPT64 mAb中筛选出亲和力较高的识别不同抗原表位的配对抗体；Protein A亲和层析纯化配对的2株mAb腹水，其中1株mAb偶联生物素(Biotin)作为检测抗体，另1株作为捕获抗体，棋盘滴定法优化捕获抗体和检测抗体的工作浓度，建立双抗体夹心ELISA方法；以常规条件作为初始反应条件，依次优化包被、封闭、抗原、抗体以及底物反应环节的条件；以MPT64抗原检测评估建立的ELISA方法的检测限、线性范围、精确性、准确性和特异性；采用该方法检测Mtb H37Ra不同阶段培养上清中MPT64含量，初步评价应用效果。结果 ELISA法成功筛选出配对抗体H2F4和A5B2 mAb;液相色谱法从腹水中纯化获得的mAb滴度分别为1∶102 400、1∶51 200。以生物素偶联的A5B2 mAb作为检测抗体，以H2F4 mAb为捕获抗体，建立并优化MPT64双抗体夹心ELISA方法，确定的试...
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| 关 键 词： | 结核分枝杆菌 分泌抗原 MPT64 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA |
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