新型冠状病毒重组蛋白疫苗的构建、表达及鉴定

目的 利用毕赤酵母系统表达重组新型冠状病毒受体结构域蛋白RBD,以期作为新冠病毒重组蛋白候选疫苗。方法 选择新型冠状病毒的RBD(受体结合域)蛋白为靶点，通过基因工程技术将RBD基因序列克隆到毕赤氏酵母表达载体pPIC9K中。通过载体将外源基因整合到毕赤酵母染色体上，获得遗传性稳定重组子。毕赤氏酵母表达载体含有醇氧化酶基因的调控序列，加入甲醇进行诱导，通过前导信号肽引导外源蛋白的分泌表达。结果 成功将RBD基因序列克隆到表达载体中并整合到酵母染色体上，获得遗传性稳定重组子。能通过前导信号肽引导目的蛋白的分泌表达，表达产物免疫动物刺激产生高水平的血清IgG抗体，IgG抗体效价为1∶2.73×10⁶。结论 重组新型冠状病毒受体结构域蛋白RBD的设计具有可行性，为重组蛋白候选疫苗在预防新型冠状病毒感染中具有潜在的应用价值。