| 昆虫杆状病毒系统表达人流感多表位基因盒的研究 |
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| 引用本文： | 李凯,丁焱,庄忻雨,田明尧,曹亮,朱光泽,金宁一.昆虫杆状病毒系统表达人流感多表位基因盒的研究[J].中国病原生物学杂志,2023(4):390-394. |
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| 作者姓名： | 李凯 丁焱 庄忻雨 田明尧 曹亮 朱光泽 金宁一 |
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| 作者单位： | 2. 中国农业科学院长春兽医研究所;3. 吉林医药学院;4. 长春中医药大学附属医院检验科 |
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| 基金项目： | 吉林省教育厅科学技术研究项目(No.JJKH20210482KJ)； |
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| 摘 要： | 目的 通过昆虫-杆状病毒表达系统表达人流感病毒多表位基因盒，为进一步研发通用型流感疫苗提供实验依据。方法 将甲型流感病毒H1N1颈部区(345aa-566aa)和H1/H3/B亚型HA2片段经4GS Linker串联M2e及ferritin蛋白构成的HA2-M2e-ferritin(简称HMf),参照A/Jilin/JYT-01/2018(H1N1)毒株的全基因组序列，将其HA2基因和HMf基因序列按照昆虫细胞密码子偏好性进行优化合成，经两次双酶切后分别克隆至pFastBacTM双载体中。热激法将重组质粒转化入DH10BacTM大肠埃希菌感受态，含目的基因的pFastBacDual-HA2-HMf转移载体与DH10Bac的Bacmid质粒重组，构建重组转移质粒rBacmid-HA2-HMf。在脂质体介导下，用rB-HA2-HMf转染Sf9细胞进行重组杆状病毒的拯救。通过限制性酶双酶切、测序、重组Bacmid PCR、Western blot和间接免疫荧光法(IFA)鉴定目的蛋白的表达。用重组杆状病毒感染悬浮sf9细胞，收取细胞悬液，经超速离心、蔗糖密度梯度离心获得重组蛋白，利用透射电镜...
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| 关 键 词： | 流感病毒 重组杆状病毒 颈部区结构域 多重保守抗原 疫苗 |
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