庚型和丙型肝炎病毒的全长cDNA克隆在体内外的表达与复制

目的：研究HGV和HCV的复制和表达。方法：利用HGV全长cDNA克隆(HGVqz)及HCV1a／1b嵌合体cDNA克隆分别构建表达质粒p3．1HGV和p3.1HCV并转染张氏肝细胞，以HGVqz克隆建立HGV转基因小鼠。分别应用RT—PCR、免疫组化及Western印迹分析病毒正、负链RNA，蛋白表达和剪切。结果：在转染p3.1HCV的张氏肝细胞及HGV转基因小鼠某些组织中可检出相应病毒的负链RNA，但在转染p3．1HGV的张氏肝细胞中未能检出HGV负链RNA。Western印迹在转染p3.1HCV的张氏肝细胞中检测到针对HCV NS3蛋白、相对分子质量约70000的特异性条带，在HGV转基因小鼠某些组织中检测到2条特异性条带，相对分子质量约42000和100000，分别相当于HGV E2蛋白及其剪切中间体。然而，在转染p3．1HGV的张氏肝细胞中检测到针对HGV E2蛋白的特异性条带，其相对分子质量约为310000，相当于HGV整个前体蛋白。结论：HGV的表达与复制在体内、外存在差异。细胞内某些特异性因子在病毒前体蛋白剪切中起重要作用，HGV和HCV前体蛋白剪切所需宿主因子可能存在差异，故两种病毒体外培养时的嗜性细胞株并不完全一致。

Replication and expression of full-length cDNA clones of hepatitis G virus and hepatitis C virus in vitro and in vivo