大鼠心肌细胞结缔组织生长因子的诱导表达及RNA干扰研究

目的： 探讨心肌细胞对结缔组织生长因子（CTGF）的基础表达及转化生长因子β1（TGF-β1）对其分泌的诱导作用，并进一步研究以RNA干扰(RNAi)技术靶向抑制CTGF对下游纤维化因子的影响。方法: 实验分为以下5组： 组Ⅰ：单纯心肌细胞组；组Ⅱ：TGF-β1诱导组；组Ⅲ：阴性质粒组；组Ⅳ：RNAi组；组Ⅴ：脂质体组。分离培养Sprague Dawley（SD）大鼠乳鼠心肌细胞，以5 μg/L终浓度的TGF-β1对培养的心肌细胞进行诱导，再通过脂质体法将靶向大鼠CTGF的短发夹RNA(shRNA)干扰质粒转染入心肌细胞，流式细胞技术分选出成功转染的细胞。通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹（Western blotting）技术进一步研究各实验组心肌细胞CTGF、纤维连接蛋白（FN）mRNA及蛋白的表达水平。结果: 单纯心肌细胞组对CTGF、FN均有低水平的基础分泌，在予以TGF-β1诱导后表达水平显著升高（P＜0.01）；而在靶向特异性RNAi后，上述因子的表达均被显著抑制（P＜0.01）；并且纤维化因子FN的表达水平与促纤维化因子CTGF的表达显著相关。结论: 心肌细胞可自主低水平分泌或诱导后高表达CTGF及下游纤维化因子FN，提示心肌细胞主动参与了心肌纤维化及心脏重塑过程；而通过RNAi靶向抑制CTGF后可阻抑心肌细胞分泌下游纤维化因子，进一步提示CTGF是促心肌纤维化的关键性细胞因子，而RNAi是一种特异高效的很有前途的干预手段。

Inducement of connective tissue growth factor expression and inhibitive effect on it by RNA interference in rat cardiomyocytes