成年大鼠体外培养肝细胞方法的研究

肝细胞培养作为观察药物是否对肝有损害作用的体外实验工具，多年来一直被广泛采用，它比整体运动用药量少，易排除体内多种因素的影响。原代培养大鼠肝细胞是一种较好的体外研究方法，以它完整的实验体系而便于作专项机理研究。我们通过多次实验探索，现察比较后选择最佳方法来获得高活率、高产率及良好生长代谢活力的肝细胞。1 材料与方法1.1 动物：wistar大鼠，雄性，体重100～150 g，饥饿24 h。1.2 试剂1.2.1 肝灌注用药 D-Hanks溶液。 胶原酶溶液：10 mg IV型胶原酶(sigma分装)溶333 mL含10%胎牛血清(EBS)的DMEM-F12培养液中，4℃冰箱保存，次日滤菌，新鲜使用。1.2.2 培养用药 DMEM-F12培养液(购自Gibco公司)：用100 mL3蒸水溶解滤菌使用。 胎牛血清：购自天津市血液研究所。