结核菌抗原基因Rv3881c在大肠杆菌中的高效表达分析

目的：从结核分枝杆菌基因组克隆Rv3881c基因并重组入pET24b载体，在大肠杆菌中进行融合表达。重组蛋白经纯化后通过Western blot分析初步鉴定其抗原性和特异性。方法：提取H37Rv标准株的基因组DNA。以基因组DNA为模板PCR扩增出Rv3881c基因，连接到pGEMT上。经过筛选鉴定后。将重组子测序；将测序正确的基因双酶切后连接到pET24b载体上，筛选得到重组载体pET24b-48；在BL21菌株中优化表达并采用金属鏊合层析方法纯化蛋白：选取6例结核病阳性临床血清标本和6例健康人血清标本进行Western blot分析。结果：发现从保存的H37Rv菌株克隆得到了读码框完全正确的Rv3881c基因。它在大肠杆菌中可以高效表达。表达量约占细菌总蛋白的20％以上。重组蛋白不与健康人血清反应。可与结核标本血清有较强的免疫印迹反应。结论：重组Rv3881c具有较好的特异性。该抗原有潜力成为检测结核的有效抗原组分之一。

Research on the high expression of Rv3881c in E.coli and the antigenecity