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| Dok4和Dok5 PTB结构域融合蛋白的表达和纯化 | |
| 引用本文： | 阎志勇,吴爱群,张勇,由振东,路长林,周明明,何成. Dok4和Dok5 PTB结构域融合蛋白的表达和纯化[J]. 河南医学研究, 2003, 12(2): 100-103 |
| 作者姓名： | 阎志勇 吴爱群 张勇 由振东 路长林 周明明 何成 |
| 作者单位： | 1. 郑州大学医学院解剖学教研室,河南郑州,450052 2. 第二军医大学神经生物学教研室,上海,200433 3. 纽约大学Mount Sinai医学院生理与生物物理学系,纽约,10029 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金 ( 3 0 0 70 167)，海外青年学者合作研究基金 ( 3 0 0 2 80 0 3 )，国家 973项目 (G19990 5 40 0 0 ) |
| 摘 要： | 目的 :制备Dok4和Dok5PTB结构域的GST融合蛋白。方法 :用PCR方法分别扩增编码Dok4、Dok5PTB结构域的cDNA ,并将其克隆入表达载体pGEX 4T 3中 ,转化大肠杆菌BL 2 1,构建成表达GST PTB融合蛋白的菌株。经IPTG诱导表达后 ,经Glutathion Sepharose 4B亲和层析柱纯化 ,用SDS PAGE进行分析 ,该融合蛋白的表达量超过菌体总蛋白的 2 5 %。结果 :获得重组的GST 4PTB和GST 5PTB融合蛋白 ,纯度在 95 %以上 ,产物得率约 75 %。结论 :成功制备高纯度Dok4和Dok5PTB结构域的GST融合蛋白 ,为进一步研究磷酸化酪氨酸结合结构域 (PTB)的结构和生物学功能奠定基础 |
| 关 键 词： | Dok4 Dok5 PTB结构域 重组蛋白 |
| 文章编号： | 1004-437X(2003)02-0100-04 |
| 修稿时间： | 2003-04-24 |
Expression and purification of the GST fusion protein of p62Dok PTB domain |
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| YAN Zhi yong ,WU Ai qun ,ZHANG Yong ,YOU Zhen dong ,LU Chang lin ,ZHOU Ming ming ,HE Cheng. Expression and purification of the GST fusion protein of p62Dok PTB domain[J]. Henan Medical Research, 2003, 12(2): 100-103 | |
| Authors: | YAN Zhi yong WU Ai qun ZHANG Yong YOU Zhen dong LU Chang lin ZHOU Ming ming HE Cheng |
| Affiliation: | YAN Zhi yong 1,WU Ai qun 1,ZHANG Yong 2,YOU Zhen dong 2,LU Chang lin 2,ZHOU Ming ming 3,HE Cheng 2 |
| Abstract: | Objective: To produce the GST PTB domain fusion protein. Methods: The cDNA encoding p62Dok PTB domain was amplified by using PCR method, and cloned into pGEX 4T 3 vector. The expression plasmid was introduced into E.coli strain BL 21. The GST PTB fusion protein accounted for over 25% of the total bacterial protein after IPTG induction, it was purified to homogeneity from the cell lysates via affinity chromatography; and analyzed by SDS PAGE gel.Results: The recombinant GST PTB fusion proteins were prepared with high purity, more than 95%, and high recovery, about 75%. Conclusion: The established method for preparation large quantity recombinant GST PTB fusion proteins would promote the structure function analysis of the PTB domain of p62 Dok protein. |
| Keywords: | Dok4 Dok5 PTB domain recombinant protein |
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