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| Dok4和Dok5 PTB结构域融合蛋白的表达和纯化 | |
| 引用本文： | 阎志勇,吴爱群,张勇,由振东,路长林,周明明,何成.Dok4和Dok5 PTB结构域融合蛋白的表达和纯化[J].河南医学研究,2003,12(2):100-103. |
| 作者姓名： | 阎志勇 吴爱群 张勇 由振东 路长林 周明明 何成 |
| 作者单位： | 1. 郑州大学医学院解剖学教研室,河南郑州,450052 2. 第二军医大学神经生物学教研室,上海,200433 3. 纽约大学Mount Sinai医学院生理与生物物理学系,纽约,10029 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金 ( 3 0 0 70 167)，海外青年学者合作研究基金 ( 3 0 0 2 80 0 3 )，国家 973项目 (G19990 5 40 0 0 ) |
| 摘 要： | 目的 :制备Dok4和Dok5PTB结构域的GST融合蛋白。方法 :用PCR方法分别扩增编码Dok4、Dok5PTB结构域的cDNA ,并将其克隆入表达载体pGEX 4T 3中 ,转化大肠杆菌BL 2 1,构建成表达GST PTB融合蛋白的菌株。经IPTG诱导表达后 ,经Glutathion Sepharose 4B亲和层析柱纯化 ,用SDS PAGE进行分析 ,该融合蛋白的表达量超过菌体总蛋白的 2 5 %。结果 :获得重组的GST 4PTB和GST 5PTB融合蛋白 ,纯度在 95 %以上 ,产物得率约 75 %。结论 :成功制备高纯度Dok4和Dok5PTB结构域的GST融合蛋白 ,为进一步研究磷酸化酪氨酸结合结构域 (PTB)的结构和生物学功能奠定基础 |
| 关 键 词： | Dok4 Dok5 PTB结构域 重组蛋白 |
| 文章编号： | 1004-437X(2003)02-0100-04 |
| 修稿时间： | 2003年4月24日 |
Expression and purification of the GST fusion protein of p62Dok PTB domain |
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| YAN Zhi yong ,WU Ai qun ,ZHANG Yong ,YOU Zhen dong ,LU Chang lin ,ZHOU Ming ming ,HE Cheng.Expression and purification of the GST fusion protein of p62Dok PTB domain[J].Henan Medical Research,2003,12(2):100-103. | |
| Authors: | YAN Zhi yong WU Ai qun ZHANG Yong YOU Zhen dong LU Chang lin ZHOU Ming ming HE Cheng |
| Institution: | YAN Zhi yong 1,WU Ai qun 1,ZHANG Yong 2,YOU Zhen dong 2,LU Chang lin 2,ZHOU Ming ming 3,HE Cheng 2 |
| Abstract: | Objective: To produce the GST PTB domain fusion protein. Methods: The cDNA encoding p62Dok PTB domain was amplified by using PCR method, and cloned into pGEX 4T 3 vector. The expression plasmid was introduced into E.coli strain BL 21. The GST PTB fusion protein accounted for over 25% of the total bacterial protein after IPTG induction, it was purified to homogeneity from the cell lysates via affinity chromatography; and analyzed by SDS PAGE gel.Results: The recombinant GST PTB fusion proteins were prepared with high purity, more than 95%, and high recovery, about 75%. Conclusion: The established method for preparation large quantity recombinant GST PTB fusion proteins would promote the structure function analysis of the PTB domain of p62 Dok protein. |
| Keywords: | Dok4 Dok5 PTB domain recombinant protein |
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