| B7-H1慢病毒的制备及其在B16F10细胞中的表达鉴定 |
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| 引用本文： | 张立群,段文元,许雪青,黄钢,陈雪丹,白云. B7-H1慢病毒的制备及其在B16F10细胞中的表达鉴定[J]. 第三军医大学学报, 2007, 29(1): 24-27 |
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| 作者姓名： | 张立群 段文元 许雪青 黄钢 陈雪丹 白云 |
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| 作者单位： | 第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室,重庆400038;第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室,重庆400038;第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室,重庆400038;第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室,重庆400038;第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室,重庆400038;第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室,重庆400038 |
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| 摘 要： | 目的 构建小鼠B7-H1分子慢病毒表达载体并包装成感染性病毒颗粒,获得稳定表达B7-H1的B16F10细胞.方法 以小鼠B7-H1的测序质粒为模板,PCR扩增B7-H1全长,装入pLenti6/V5-D-TOPO慢病毒表达载体,经过测序证实其序列与标准序列完全一致.将B7-H1表达载体用LipofectamineTM2000转染293FT细胞,包装成感染性病毒颗粒,感染B16F10细胞后,加入含Blasticidin(终浓度为4.0 μg/ml)的RPMI1640培养基,筛选出稳定表达B7-H1蛋白的B16F10细胞株.结果 PCR扩增得到编码小鼠B7-H1的877 bp基因片段,与预期大小一致.B7-H1重组慢病毒感染B16F10细胞后,用B7-H1单抗进行免疫组化检测,荧光显微镜观察显示B7-H1分子表达于B16F10细胞.FACS测定B16F10细胞荧光阳性率为36%.结论 成功构建了B7-H1慢病毒表达载体,包装出感染性病毒颗粒,重组慢病毒感染B16F10细胞后表达出有活性的B7-H1膜表面蛋白,为进一步研究B7-H1分子在器官移植、自身免疫性疾病以及肿瘤免疫逃逸机制中的作用奠定了基础.
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| 关 键 词： | B7-H1 慢病毒 基因治疗 |
| 文章编号： | 1000-5404（2007）01-0024-04 |
| 修稿时间： | 2006-07-11 |
Construction of recombinant lentivirol expression vector carrying mouse B7-H1 gene and its expression and identification in B16F10 cells |
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| ZHANG Li-qun,DUAN Wen-yuan,XU Xue-qing,HUANG Gang,CHEN Xue-dan,BAI Yun. Construction of recombinant lentivirol expression vector carrying mouse B7-H1 gene and its expression and identification in B16F10 cells[J]. Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae, 2007, 29(1): 24-27 |
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| Authors: | ZHANG Li-qun DUAN Wen-yuan XU Xue-qing HUANG Gang CHEN Xue-dan BAI Yun |
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| Affiliation: | Department of Medical Genetics, College of Medicine, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | B7-H1 |
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