蓝萼甲素对宫颈癌C33A细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的　探讨蓝萼甲素（GLA）对宫颈癌C33A细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法　将对数生长期宫颈癌C33A细胞随机分为阴性对照组、5 μmol·L^-1 GLA组、10 μmol·L^-1 GLA组、20 μmol·L^-1 GLA组、40 μmol·L^-1 GLA组，阴性对照组细胞不加任何药物干预，5 μmol·L^-1 GLA组、10 μmol·L^-1 GLA组、20 μmol·L^-1 GLA组、40 μmol·L^-1 GLA组细胞分别加入终浓度为5、10、20、40 μmol·L^-1 GLA进行干预。分别于培养24、48、72 h时，采用3,3′-［1-(苯氨酰基) -3,4-四氮唑］-二 (4-甲氧基-6-硝基) 苯磺酸钠法检测5组细胞的增殖抑制率；于培养48 h时，采用流式细胞术检测阴性对照组、5 μmol·L^-1 GLA组、10 μmol·L^-1 GLA组、20 μmol·L^-1 GLA组细胞凋亡率，Western blot法检测阴性对照组、5 μmol·L^-1 GLA组、10 μmol·L^-1 GLA组、20 μmol·L^-1 GLA组细胞中磷酸化B淋巴细胞瘤-2基因相关启动子（p-BAD）和10号染色体缺失与张力蛋白同源磷酸酶（PTEN）蛋白相对表达量。结果　培养24、48、72 h时，5 μmol·L^-1 GLA组、10 μmol·L^-1 GLA组、20 μmol·L^-1 GLA组、40 μmol·L^-1 GLA组细胞增殖抑制率显著高于阴性对照组，10 μmol·L^-1 GLA组、20 μmol·L^-1 GLA组、40 μmol·L^-1 GLA组细胞增殖抑制率显著高于5 μmol·L^-1 GLA组，20 μmol·L^-1 GLA组、40 μmol·L^-1 GLA组细胞增殖抑制率显著高于10 μmol·L^-1 GLA组，40 μmol·L^-1 GLA组细胞增殖抑制率显著高于20 μmol·L^-1 GLA组（P<0.05）。不同浓度GLA组细胞培养48、72 h时的增殖抑制率显著高于培养24 h时，培养72 h时的增殖抑制率显著高于培养48 h时（P<0.05）。5 μmol·L^-1 GLA组、10 μmol·L^-1 GLA组、20 μmol·L^-1 GLA组细胞凋亡率显著高于阴性对照组，10 μmol·L^-1 GLA组、20 μmol·L^-1 GLA组细胞凋亡率显著高于5 μmol·L^-1 GLA组，20 μmol·L^-1 GLA组细胞凋亡率显著高于10 μmol·L^-1 GLA组（P<0.05）。5 μmol·L^-1 GLA组、10 μmol·L^-1 GLA组、20 μmol·L^-1 GLA组细胞中p-BAD蛋白相对表达量显著低于阴性对照组，PTEN蛋白相对表达量显著高于阴性对照组（P<0.05）；10 μmol·L^-1 GLA组、20 μmol·L^-1 GLA组细胞中p-BAD蛋白相对表达量显著低于5 μmol·L^-1 GLA组，PTEN蛋白相对表达量显著高于5 μmol·L^-1 GLA组（P<0.05）；20 μmol·L^-1 GLA组细胞中p-BAD蛋白相对表达量显著低于10 μmol·L^-1 GLA组，PTEN蛋白相对表达量显著高于10 μmol·L^-1 GLA组（P<0.05）。结论　GLA可通过上调PTEN蛋白、降低p-BAD的表达，抑制C33A细胞增殖，促进C33A细胞凋亡，且呈剂量依赖性。

Effect and mechanism of Glaucocalyxin A on proliferation and apoptosis of cervical cancer C33A cells

Objective　To investigate the effect of Glaucocalyxin A(GLA) on proliferation and apoptosis of cervical cancer C33A cells and its mechanism.
Methods　The cervical cancer C33A cells in logarithmic growth phase were randomly divided into negative control group,5 μmol·L^-1 GLA group,10 μmol·L^-1 GLA group,20 μmol·L^-1 GLA group and 40 μmol·L^-1 GLA group.The cells in the negative control group were treated without any drug;the cells in the 5 μmol·L^-1 GLA group,10 μmol·L^-1 GLA group,20 μmol·L^-1 GLA group and 40 μmol·L^-1 GLA group were treated with the final concentration of 5,10,20,40 μmol·L^-1 GLA,respectively.At 24,48,72 h of culture,the inhibitory rate of cell proliferation in the 5 groups were detected by Sodium3,3′- ［1-(phenylamino)carbonyl-3,4-tetrazolium-bis(4-methoxy-6-nitro)］ benzenesulfonic acid assay;at 48 h of culture,the apoptosis rate of cells in the negative control group,5 μmol·L^-1 GLA group,10 μmol·L^-1 GLA group and 20 μmol·L^-1 GLA group were detected by flow cytometry;the expressions of phosphorylated Bcl-xl/Bcl-2 associated death promoter (p-BAD) and phosphatase and tensin ho-molog deleted from chromosome 10(PTEN) in cells in the negative control group,5 μmol·L^-1 GLA group,10 μmol·L^-1 GLA group and 20 μmol·L^-1 GLA group were detected by Western blot.
Results　At 24,48,72 h of culture,the inhibitory rate of cell proliferation in the 5 μmol·L^-1 GLA group,10 μmol·L^-1 GLA group,20 μmol·L^-1 GLA group and 40 μmol·L^-1 GLA group was significantly higher than that in the negative control group (P<0.05);the inhibition rate of cell proliferation in the 10 μmol·L^-1 GLA group,20 μmol·L^-1 GLA group and 40 μmol·L^-1 GLA group was significantly higher than that in the 5 μmol·L^-1 GLA group(P<0.05);the inhibitory rate of cell proliferation in the 20 μmol·L^-1 GLA group and 40 μmol·L^-1 GLA group was significantly higher than that in the 10 μmol·L^-1 GLA group(P<0.05);the inhibitory rate of cell proliferation in the 40 μmol·L^-1 GLA group was significantly higher than that in the 20 μmol·L^-1 GLA group (P<0.05).The inhibition rate of cell proliferation at 48 h and 72 h of culture was significantly higher than that at 24 h of culture,and the inhibition rate of cell proliferation at 72 h of culture was significantly higher than that at 48 h of culture in different concentrations of GLA groups (P<0.05).The apoptosis rate of cells in the 5 μmol·L^-1 GLA group,10 μmol·L^-1 GLA group and 20 μmol·L^-1 GLA group was significantly higher than that in the negative control group(P<0.05);the apoptosis rate of cells in the 10 μmol·L^-1 GLA group and 20 μmol·L^-1 GLA group was significantly higher than that in the 5 μmol·L^-1 GLA group (P<0.05);the apoptosis rate of cells in the 20 μmol·L^-1 GLA group was significantly higher than that in the 10 μmol·L^-1 GLA group (P<0.05).The relative expression level of p-BAD protein in the 5 μmol·L^-1 GLA group,10 μmol·L^-1 GLA group and 20 μmol·L^-1 GLA group was significantly lower than that in the negative control group,the relative expression level of PTEN protein was significantly higher than that in the negative control group (P<0.05);the relative expression level of p-BAD protein in the 10 μmol·L^-1 GLA group and 20 μmol·L^-1 GLA group was significantly lower than that in the 5 μmol·L^-1 GLA group,the relative expression level of PTEN protein was significantly higher than that in the 5 μmol·L^-1 GLA group (P<0.05);the relative expression level of p-BAD protein in the 20 μmol·L^-1 GLA group was significantly lower than that in the 10 μmol·L^-1 GLA group,the relative expression level of PTEN protein was significantly higher than that in the 10 μmol·L^-1 GLA group(P<0.05).
Conclusion　GLA can inhibit the proliferation and promote the apoptosis of C33A cells by up-regulating the expression of PTEN protein and reducing the expression of p-BAD protein,and this is in a dose-dependent manner.