快速鉴定结核杆菌的双重分子信标检测体系的优化

目的优化双重分子信标的实验体系以快速检测结核杆菌及其耐药菌株。方法选择不同镁离子浓度、退火温度、引物浓度分别进行荧光定量PCR,最终得出最佳反应条件。结果为保证扩增效率且无非特异性扩增,最终选择最佳条件是:Mg~(2+)浓度3.0mmol/L;退火温度60℃;引物浓度0.3mmol/L。结论确立了双重分子信标实验的最优条件,从而保证了分子信标荧光定量PCR检测结核杆菌具有操作简便、快速、灵敏度高(最低可检测1CFU/mL)、特异性强(只能检测包括耐药菌株的结核杆菌复合群)、重复性好(变异系数5%)等优势,为双重分子信标检测结核杆菌提供了必要条件。