| 结核杆菌Esat6与hGM-CSF双顺反子表达载体的构建及鉴定 |
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| 作者姓名： | 李君武 黄泽棋 姚翠婵 林绍强 周曙光 李晓栋 宋东 黄清华 王珊 |
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| 作者单位： | 暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室,广州,510632 |
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| 基金项目： | 广东省科学计划引导项目 |
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| 摘 要： | 目的 从质粒pVAE中克隆目的基因Esat6,与hGM-CSF一起构建双顺反子表达载体pIEG,并进行鉴定.方法 以质粒pVAE为模板扩增出Esat6基因,与pIRES的MCS A进行重组,构建pIEsat6重组质粒.然后再以pORF-hGM-CSF为模板扩增出hGM-CSF基因,与pIRES载体的MCS B进行重组,构建pIGM重组质粒,上述两重组质粒经PCR、限制性内切酶图谱及DNA序列测定分析等多种方法进行鉴定后,再通过酶切、连接把hGM-CSF构建于pIEsat6质粒中,形成双顺反子真核表达载体pIEG.结果 通过PCR可克隆得到相应大小的产物,酶切鉴定所切下的两片段大小约为0.29 kb和0.47 kb,与预计相符.测序结果与报道一致.结论 成功构建结核杆菌Esat6基因与hGM-CSF双顺反子真核表达载体,为进一步研究其结核融合DNA疫苗及其转染DC疫苗原型的免疫保护效果奠定了基础.
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| 关 键 词： | 结核分支杆菌 Esat6 hGM-CSF 双顺反子 DNA疫苗 |
| 收稿时间： | 2006-10-26 |
| 修稿时间： | 2006-10-26 |
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