肺炎克雷伯菌KbvR调控因子对细菌生物膜与荚膜形成能力的影响 |
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引用本文: | 徐丽,林迪斯,杨靖,李健,李蓓. 肺炎克雷伯菌KbvR调控因子对细菌生物膜与荚膜形成能力的影响[J]. 南方医科大学学报, 2016, 36(10): 1435-1439. DOI: 10.3969/j.issn.1673-4254.2016.10.24 |
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作者姓名: | 徐丽 林迪斯 杨靖 李健 李蓓 |
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作者单位: | 湖北医药学院基础医学院,湖北 十堰,442000 |
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基金项目: | 湖北省教育厅优秀中青年科技创新团队项目(T201612) |
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摘 要: | 目的构建肺炎克雷伯菌LuxR家族KbvR基因缺失突变株与回补株,分析KbvR在肺炎克雷伯菌生长、生物膜形成及荚膜生成中的作用。方法通过自杀载体pKO3-Km质粒构建KbvR基因敲除株,然后扩增出包含KbvR基因编码区、启动子结合区及转录终止区的基因片段,克隆至pGEM-T-easy质粒上构建KbvR基因回补株。绘制不同菌株生长曲线,了解KbvR对细菌生长的影响。通过结晶紫定量实验检测KbvR基因对细菌生物膜形成的影响,拉丝实验、离心试验及RT-PCR检测KbvR基因对细菌荚膜形成的影响。结果成功获得KbvR基因缺失突变株及回补株,RT-PCR结果显示KbvR基因在缺失突变株中不表达,在回补株中重新表达。KbvR基因不影响细菌的生长速度,基因敲除株后细菌生物膜形成及荚膜生成能力下降。体外试管静止培养48 h,与野生株相比基因缺失突变株生物膜形成能力明显下降,而KbvR基因回补株在液体培养基表面能形成明显生物膜。结晶紫染色定量实验发现,基因缺失突变株生物膜形成能力显著低于野生株(P<0.01)。超粘性实验和RT-PCR结果均显示,KbvR基因缺失突变株荚膜形成能力明显下降,说明KbvR基因影响肺炎克雷伯菌生物膜和荚膜的形成。结论KbvR基因作为密度感应系统LuxR孤儿调控转录因子,正调控肺炎克雷伯菌生物膜的形成。荚膜是细菌生物膜形成的重要因素,KbvR基因可通过影响荚膜形成而调控生物膜的形成。
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关 键 词: | 肺炎克雷伯菌 KbvR调控子 生物膜形成 荚膜生成 |
Effect of Klebsiella pneumoniae KbvR regulator on bacterial biofilm formation and capsular synthesis |
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Abstract: | |
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Keywords: | Klebsiella pneumoniae KbvR biofilm formation capsular synthesis |
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