TNF-α诱导大鼠软骨细胞焦亡模型的建立与评价 |
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引用本文: | 徐靓,吴玉娇,袁晓阳,张峰,程刚,张运芳,魏伟,严尚学.TNF-α诱导大鼠软骨细胞焦亡模型的建立与评价[J].安徽医科大学学报,2022(5):781-786. |
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作者姓名: | 徐靓 吴玉娇 袁晓阳 张峰 程刚 张运芳 魏伟 严尚学 |
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作者单位: | 安徽医科大学临床药理研究所抗炎免疫药物教育部重点实验室抗炎免疫药物安徽省工程技术研究中心 |
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基金项目: | 安徽高校自然科学研究重大项目(编号:KJ2020ZD15); |
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摘 要: | 目的 建立肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的大鼠软骨细胞焦亡模型并评价模型的特点。方法 两步酶消化法获取大鼠膝关节软骨细胞,倒置相差显微镜观察大鼠软骨细胞的形态结构,甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原(ColⅡ)免疫组化染色鉴定大鼠软骨细胞,用不同质量浓度TNF-α(5、10、20、40 ng/ml)诱导建立大鼠软骨细胞的焦亡模型,以TNF-α(0 ng/ml)为对照组。CCK-8法检测大鼠软骨细胞活力,Western blot检测大鼠软骨细胞焦亡信号相关蛋白,确定最佳刺激浓度,ELISA法检测细胞培养上清液中IL-1β、IL-18的水平,免疫荧光检测大鼠软骨细胞gasdermin D(GSDMD)表达,扫描电镜观测大鼠软骨细胞焦亡的形态学改变。结果 与对照组相比,大鼠软骨细胞的活力随着TNF-α浓度升高而逐渐下降,并且核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 (NLRP3)、半胱天冬酶1(caspase-1)、GSDMD、磷酸化核转录因子-κB p65(P-p65)蛋白的表达增加。TNF-α(20 ng/ml)可诱导大鼠软骨细胞基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达上调,ColⅡ表达减少,GSDM...
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关 键 词: | TNF-α 骨关节炎 软骨细胞 焦亡 |
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