| 人前列腺干细胞抗原在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备 |
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| 引用本文： | 顾正勤,许传亮,孙颖浩,高旭,王林辉,GU Zheng-qin,XU Chuan-liang,SUN Ying-hao. 人前列腺干细胞抗原在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备[J]. 第二军医大学学报, 2006, 27(3): 344-346 |
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| 作者姓名： | 顾正勤 许传亮 孙颖浩 高旭 王林辉 GU Zheng-qin XU Chuan-liang SUN Ying-hao |
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| 作者单位： | 1. 第二军医大学长海医院泌尿外科,上海,200433;复旦大学华山医院泌尿外科,上海,200040
2. 第二军医大学长海医院泌尿外科,上海,200433 |
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| 基金项目： | 中国科学院资助项目，上海市青年科技启明星计划 |
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| 摘 要： | 目的:克隆并在大肠杆菌中表达人前列腺干细胞抗原(PSCA)基因,制备其抗血清.方法:通过PCR方法扩增包含蛋白融合点的PSCA基因片段,经DNA测序证实后克隆至带有Trx.6His标签的原核表达载体pET32a,重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达结果,经Ni-NTA树脂亲和纯化的蛋白皮下注射免疫小鼠,ELISA检测抗血清的滴度,免疫组化鉴定其特异性.结果:PCR扩增得到241 bp的目的片段,序列测定证实与GenBank上登录的序列一致;成功构建了PSCA基因片段的原核表达载体pET32a-PSCA;在大肠杆菌中表达,于相对分子质量为20.4×103处有一蛋白新生带;PSCA融合蛋白免疫小鼠后,ELISA确认抗血清的滴度>1∶4 000.抗血清检测到前列腺癌组织中PSCA的表达. 结论:成功克隆、表达了人PSCA融合基因片段,并制备了相应的抗血清.
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| 关 键 词： | 前列腺 干细胞 抗原 基因表达 免疫血清 |
| 文章编号： | 0258-879X（2006）03-0344-03 |
| 收稿时间： | 2005-09-15 |
| 修稿时间： | 2005-11-01 |
Expression of human prostate stem cell antigen in E.coli and preparation of its antiserum |
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