| 抗血小板膜糖蛋白Ⅰbα/Ⅲa双特异单链抗体的构建及其功能研究 |
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| 引用本文： | 戴克胜,安广宇,阮长耿. 抗血小板膜糖蛋白Ⅰbα/Ⅲa双特异单链抗体的构建及其功能研究[J]. 中华医学杂志, 2002, 82(21) |
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| 作者姓名： | 戴克胜 安广宇 阮长耿 |
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| 作者单位： | 215006,苏州大学附属第一医院,江苏省血液研究所,江苏省核医学生物技术重点实验室 |
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| 摘 要： | 目的构建、表达抗血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰbα/GPⅢa双特异单链抗体,为其进一步研究、应用奠定基础.方法应用PCR技术,扩增出接头片段和SZ-21单链抗体基因,克隆入pUCm-T载体,测序分析.应用基因重组技术将接头片段、SZ-21单链抗体基因和SZ-2单链抗体基因重组拼接,构建SZ-2/SZ-21双特异单链抗体表达载体pET22-21-L-2scFv,并测序验证.导入大肠杆菌BL21(DE3)Plys,诱导表达.流式细胞术、ELISA、Western blot检测SZ-2/SZ-21双特异单链抗体与血小板结合能力,瑞斯托霉素、凝血酶和ADP诱导血小板聚集试验对表达产物功能进行研究.结果表达载体pET22-21-L-2scFv构建拼接正确;表达产物以包涵体形式为主,表达量占菌体总蛋白的14%;经变性、纯化、复性,表达产物具有与血小板以及血小板GPⅠbα和Ⅲa结合活性,可抑制瑞斯托霉素、凝血酶和ADP诱导的血小板聚集并呈剂量依赖性.结论成功表达了SZ-2/SZ-21双特异单链抗体,该抗体具有与相应2个靶抗原结合活性,并可抑制瑞斯托霉素、凝血酶和ADP诱导的血小板聚集.
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| 关 键 词： | 抗体,双特异性 血小板糖蛋白GPIIb-IIIa复合物 |
Construction and characterization of bispecific single-chain antibody fragments SZ-2/SZ-21 against platelet glycoprotein Ibαandβ3 |
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