miR-544a对非小细胞肺癌细胞系Wnt信号通路抑制因子GSK3β表达的调控作用

摘要：目的：探讨微小RNA-544a(miR-544a)对肺癌干细胞的自我更新能力影响及其可能的机制。 方法：通过生物信息学预测miR-544a的靶向基因，用荧光素酶报告系统及western blot验证其靶向关系；构建稳定表达miR-544a的非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系95C和95D，并用荧光定量PCR验证；用肿瘤球悬浮培养实验检测miR-544a在形成肿瘤球中的作用。 结果：生物信息学预测发现，miR-544a可以靶向调节Wnt信号通路的抑制子GSK3β，并通过荧光素酶报告系统得到了验证（F=201.37，P＜0.01）；western blot结果显示，miR-544a可以下调GSK3β的表达，而β-catenin、CD133蛋白表达水平明显上调（F分别为7.73,3.37,9.43，P均＜0.01）；荧光定量PCR结果显示，95C、95D细胞在转染miR-544a后，miR-544a表达水平增高，分别为20.51±0.97、15.16±1.38 (F=418.05,P＜0.01)。肿瘤球悬浮培养实验发现，稳定表达miR-544a的细胞能够反复形成具有肿瘤干细胞特性的肿瘤球。 结论：miR-544a可以通过直接下调GSK3β的表达来激活Wnt信号通路，以维持肺癌干细胞自我更新能力。